Técnicas para evaluar
Inmunodeficiencias
Inmunología Aplicada 1065
Carolina Hernández Martínez
Formación de profesores 2005
Supervisado por Ma. Dolores Lastra
Biometría Hemática
Número total de eritrocitos, plaquetas, linfocitos,
monocitos y granulocitos.
Linfocitos B: CD18,CD19, CD20, CD21, CD22,
CD23, CD25, CD43, CD44
Linfocitos T: CD3, CD4, CD8, CD18, CD25,
CD43, CD44
Células NK: CD56, CD16, CD18, CD43, CD44
Neutrófilos: CD11a, CD63
Monocitos-Macrófagos: CD14, CD18, CD23,
CD25, CD43, CD44
Función de las células T
Pruebas cutáneas de hipersensibilidad
retardada.
Estudios funcionales in vitro.
Respuesta linfoproliferativa.
Produción de mediadores: citocinas.
Citotoxicidad T CD8+.
Citotoxicidad NK.
Prueba de hipersensibilidad retardada
Respuesta linfoproliferativa
Consiste en cultivar linfocitos del paciente
con los antígenos que quieren ser
evaluados o estudiados y con varios
mitógenos que se utilizan como control de
la inmunoproliferación (estimulación no
específica). La transformación blástica
específica se mide por la capacidad que
tiene el antígeno de inducir la proliferación
linfocitaria.
Rosetas con los eritrocitos
Los linfocitos T presentan la característica
de formar rosetas cuando se unen a los
eritrocitos de carnero . Se pueden
cuantificar los linfocitos T incubándolos
con eritrocitos de carnero (reconocimiento
de moléculas CD2+ y CD58+) y la
posterior observación al microscopio se
numeran las rosetas (entre 70 y 80%
positivas en pacientes normales).
ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE LOS
LINFOCITOS T (CD 8+)
La actividad citotóxica de los linfocitos T
(CD 8+) frente a una célula blanco se
puede estudiar, midiendo la capacidad de
destrucción, que un determinado número
de linfocitos T tienen para destruir un
determinado número de células blanco, al
estar ambas poblaciones en contacto. Se
puede medir mediante la liberación de
Cr51 por las células blanco previamente
marcadas.
Citotoxicidad NK
En esta prueba se mide la capacidad de
estas células para matar células blanco
especiales (K562). La citotoxicidad suele
determinarse mediante el uso de Cr51.
Por citometría de flujo se determina la
actividad de estas células utilizando los
marcadores específicos.
Subpoblaciones de T
Mediante anticuerpos monoclonales se
pueden marcar las diferentes poblaciones
linfocitarias:
Linfocitos Th: CD4+
Linfocitos Tc: CD8+
Las mediciones obtenidas se indican en
porcentajes de cada población.
Se pueden utilizar otros marcadores.
Evaluación de la Fagocitosis
Índice
Fagocítico.
Determina
la
capacidad de fagocitar de los leucocitos,
pero no el poder para digerir las partículas
fagocitadas.
Actividad bactericida. Complementa la
prueba anterior y determina si las
bacterias fagocitadas son o no destruidas
por las lisozimas de los fagosomas de los
leucocitos.
Prueba del NBT
Es posible observar la
reducción
del
nitroazul de tetrazolio
(NBT) debido a que
éste
acepta
un
protón, cambiando su
típica
coloración
amarilla transparente
por un azul intens
(azul formazán).
Prueba de la reducción de
dihidrorodamina (DHR).
Los fagocitos reducen el DHR a un
compuesto fluorescente en individuos
sanos. Al no haber presencia de
fluorescencia se suele tratar de una EGC
ligada al X, pero con presencia en bajas
cantidades, hablamos usualmente de una
AR.
Eritrofagocitosis
Se basa en la cuantificación de la
hemoglobina liberada por los eritrocitos
que han sido fagocitados utilizando un
espectrofotómetro.
En una placa, se colocan una
concentración conocida de macrófagos
del paciente en seis pozos, se incuban. Se
coloca SRBC opsonizados (es decir,
unidos al complemento o IgG) y sin
opsonizar, se incuban.
Se añade el sustrato y se
mide la
absorbancia.
Eritrofagocitosis
Ventana cutánea de Rebuck.
Normalmente se presenta un acúmulo de PMN
en las primeras 6 horas, después es sustituido
por uno de linfocitos (poco utilizada).
Quimiotaxia
Se basan en medir
la
locomoción
direccional de los
neutrófilos
hacia
diversos estímulos
quimiotácticos:
Cámara
de
Boyden.
Quimioluminiscencia
Los
neutrófilos
emiten
pequeñas
cantidades de radiación electromagnética
después
de
la
ingestión
de
microorganismos. Durante la explosión
respiratoria se genera oxígeno molecular
(inestable y muy reactivo) se combina con
bacterias
u
otros
elementos
intralisosómicos
formando
grupos
carboxilo de inestabilidad electrónica.
Cuando estos grupos regresan a su
estado basal, emiten energía lumínica.
Evaluación General de la Inmunidad Mediada por Anticuerpos
Métodos Inmunológicos utilizados para identificar
anormalidades fenotípicas y defectos genéticos y moleculares
Evaluación fenotípica
Concentración de Inmunoglobulinas en suero
Subclases de IgG
Anticuerpos específicos
Anticuerpos antiproteínas
Anticuerpos contra tétanos y difteria
Anticuerpos contra H influenza
Anticuerpos antipolisacárido
Isohematoaglutininas
Anticuerpos contra el polisacárido del neumococo
Anticuerpos antibacteriófago
Enumeración Células B (poca aplicación)
Evaluación de la función de células T
Evaluación de defectos genéticos y moleculares
Detección de defectos moleculares en células B y T
Identificación de anormalidades genéticas
Pruebas para células B
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Proteínas (Electroforesis)
IgA,IgE
Isohematoaglutininas AB (IgM)
Anticuerpos antitoxoide tetánico (función IgM)
Anticuerpos antitoxoide diftérico (función IgG)
Anticuerpos anti candida
Anticuerpos anti pneumococo
Antígeno CD20 (función de células B)
Subclases de IgG
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