Detección de productos
PCR por Electroforesis
en Gel de Agarosa
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1. Preparación de la cámara
Gel
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1. Preparación de la cámara de Gel
1.1 Añadir 1g de Agarosa a 33 ml TAEBuffer en un matraz Erlenmeyer de
100ml
1.2 Hervir la mezcla en un microondas,
agítala e hiervela de nuevo.
1.3 Deja enfriar la solución de agarosa
hasta 55 °C ( test del dorso de la mano)y
vierte el gel.
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1. Preparación de la cámara de Gel
1.4 Después de que el gel está sólido, quita
las varillas metálicas de la cámara de
electroforesis .
1.5 Rellena la cámara de electroforesis con
270 ml TAE-Buffer para cubrir el gel
1.6 Retira el peine!
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2. Preparación de las muestras
para la Electroforesis en
gel
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2. Preparación de las muestras para la
electroforesis en Gel
2.1 Saca tus 6 tubos de PCR del
termociclador!
2.2 Ponlos en sus correspondientes
gradillas!
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2. Preparación de muestras para
Electroforesis en gel
2.3 Pipetea 10 µl Naranja G descargando el
colorante (LD) en cada uno de los 6
tubos con PCR y mézclalos, golpeándo
ligeramente el fondo del tubo con tus
dedos.
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3. Rellenar los pocillos del Gel
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3. Rellenar los pocillos del Gel
3.1 Rellena los pocillos del gel de izquierda
a derecha con:
- 20 µl patrón de pesos moleculares (MWR)
- 20 µl –GMO control con PMM (1)
- 20 µl –GMO control con GMM (2)
- 20 µl muestra de comida(T) con PMM (3)
- 20 µl muestra de comida (T) con GMM (4)
- 20 µl +GMO-DNA con PMM (5)
- 20 µl +GMO-DNA
con GMM (6)
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4. Corriendo la Electroforesis
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4. Corriendo la Electroforesis
4.1 Cierra la cámara de electroforesis y
conéctala a 120 V.
4.2 Detén la electroforesis cuando el
colorante Naranja G haya migrado a 1
cm antes del final del gel.
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5. Haciendo visibles los
fragmentos de DNA
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5. Haciendo visibles los fragmentos de
ADN
5.1 Abre la cámara de electroforesis saca
la placa con el gel.
Cuidado con el gel es muy escurridizo!
(recoge el TAE buffer, podría utilizarse
de nuevo )
5.2 Transfiere el gel en una bandeja de
tinción y añade 70 ml de solución de
tinción (50x) agitándolo ligeramente
durante 2 minutos
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5. Haciendo visibles los fragmentos de
ADN
5.3 Quitar la solución de colorante después
de dos minutos y desteñir en agua caliente
del grifo (40 - 50 °C) agitarlo suavemente
por 20 minutes.!
Guarda el colorante para un futuro uso
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6. Evaluación
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6. Evaluación
6.1 Identificar las bandas de ADN en el gel
con la ayuda de el patrón de pesos
moleculares, con las siguientes longitudes:
100 bp, 200 bp, 500 bp,700 bp, 1000 bp!
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6. Evaluación
6.2 Está tu muestra de alimento (T)
genéticamente modificado?
Prepara una breve charla sobre tus resultados
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6. Evaluación
6.2 Está tu muestra de alimento (T)
genéticamente modificado?
Prepara una breve charla sobre tus resultados
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DANN-FINGERPRINTING (Genetischer Fingerabdruck)