OPERON LAC
OPERON LAC
“Operón”: Es una unidad de trasncripción: genes
estructurales regulados por un promotor y un
operador .
Ejemplo: Los genes involucrados en el uso de la
Lactosa como fuente de carbono, se encuentran
agrupados y codifican para enzimas que participan
en la misma vía metabólica.
OPERON LAC
COMPOSICIÓN.
a) Genes estructurales (en tándem).
• gen lac Z codifica para la expresión de la β-galactosidasa
• el gen lac Y que codifica para la permeasa del galactósido.
• el gen lac A, codifica para la acetiltransferasa de tiogalactósido.
Se transcriben desde un promotor común en un mRNA
policistrónico, el cual es traducido para dar lugar a las tres
enzimas.
COMPOSICIÓN
b) Promotor
Sitio donde la polimerasa de RNA se une al
DNA antes del inicio de la transcripción.
COMPOSICIÓN.
c) Operador
• Por lo general se localiza adyacente o
traslapado con el promotor , sirve como el sitio
de unión de una proteína, conocida como
represor (ejemplo de proteína reguladora de
genes).
• La proteína reguladora de genes (represor)
reconoce una secuencia especifica dentro del
DNA y se une a esta con alta afinidad.
COMPOSICIÓN
d) Gen Regulador.
• La expresión de los genes estructurales también esta
controlada por un gen regulador específico.
• El gen regulador puede estar cerca o lejos de los
genes que están siendo regulados. El gen regulador
codifica para una proteína específica, un producto
denominado REPRESOR.
En este tipo de operador inducible como lac, la
proteína represora sólo puede unirse al DNA en
ausencia de lactosa, que funciona como un
INDUCTOR.
CONTROL POSITIVO POR
cAMP.
La concentración de cAMP en las células se relaciona con la presencia de
glucosa en el medio; a mayor concentración de glucosa, menor concentración
de cAMP.
El cAMP actúa en las células procariotas al unirse a una proteína, en este
caso la proteína receptora de cAMP (CAP). Aunque CAP es incapaz de unirse
al DNA, el complejo cAMP-CAP reconoce y se une a un sitio especifico de la
región de control de LAC, aumentando la afinidad de la región promotora por
la RNA polimerasa, lo que estimula la transcripción del Operón.
La presencia del complejo cAMP-CAP es necesaria para la transcripción del
Operón, aun cuando la lactosa esta presente y el represor es inactivo.
1. β-Galactosidasa Lac Z
2. Represor transcripcional del operón Lac, Lac I
3. Lactosa permeasa Lac Y
4. Activador transcripcional del operón Mph
9 . Galactosidasa -O-Acetiltransferasa Lac A
E. coli en medio mínimo
Medio mínimo
A
15 min Glu 2%
B
Lac 2 %
C
Glu + Lac
2%
7.5 min
D
Glu 2 %
½ tiempo
+ Lac 2 %
E
Glu + Lac
2%
Centrifugar a 10,000 rpm, decantar sndnt
Resuspender bacterias en 250 µL de amortiguador Z
Añadir 25 µL de CHCl3 + 12.5 µL SDS 0.1 %
Añadir 50 µL de ONPG, Incubar 2 min. TA
Añadir 125 µL Na2CO3 1 M
Observar color
Descargar

OPERON LAC - Bqexperimental`s Blog | Bioquímica