UICC
HPV and
CERVICAL
CANCER
CURRICULUM
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
01
Capítulo 2.d.
Detección y diagnóstico -- análisis
y tipificación del VPH
Prof. Suzanne Garland MD
Directora de Investigación Microbiólogica, Jefe de
Microbiología Clínica y Enfermedades Infecciosas
The Royal Women's Hospital
Melbourne, Australia
Associate Prof. Sepehr Tabrizi
Investigador Principal, Departamento de Microbiología
The Royal Women's Hospital
Melbourne, Australia
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
02
Partículas similares al virus
(VLPs)
• Ánalogos no infecciosos de un virus patógeno
• VLP-L1 se ensambla in vitro en cápsides vacías o ‘VLPs’
• La producción de VLP no es estandarizada
- Sistemas de expresión diferentes, métodos de
preparación, métodos de control de calidad
- Formatos de identificación varían (directa e indirecta)
- No hay estándar de oro para establecer el umbral de
resultado positivo
- Pocas comparaciones entre laboratorios
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
03
Partículas similares al virus
(VLPs)
• VLPs pueden ser analizadas mediante técnicas de
microscopía electrónica
W
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
04
Detección de anticuerpos VPH
• Anticuerpos
- Su presencia representa una infección en el pasado o
presente
- Se puede generar contra las proteínas del VPH
tempranas (early/E) o tardías (late/L)
- Presencia de anticuerpos neutralizantes L1 correlacionan
con protección antiviral iniciada por la vacuna
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
05
Detección de anticuerpos VPH
• Se han desarollado diversos métodos de análisis para
detectar anticuerpos en el suero/mucosa:
- Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA):
mide las inmunoglobinas (Ig) en su totalidad, tanto
neutralizantes como no neutralizantes.
- Ensayos de unión competitiva, por ejemplo, el ensayo
competitivo Luminex (cLIA): mide las Ig neutralizantes a
un epítopo solamente, pero todas las diferentes clases de
Ig
- Ensayo pseudovirión: mide el total de Ig neutralizantes,
de todas las subclases
- Western blot
- Radio-inmunoprecipitación
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
06
Detección de AND del VPH en el tejido por
microscopio
• Inmunohistoquímica (antígeno especifico de grupo)
• Citología Pap: detecta células precancerosas
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
07
Técnicas de detección molecular de ADN
del VPH
Métodos de amplificación
• Amplificación de la señal
- Captura de híbridos/Hybrid Capture (HC2)
• Amplificación del objetivo
- Reacción en cadena de la polimerasa – PCR de ADN
del VPH
- ARNm del VPH
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
08
Análisis Hybrid Capture 2
• Prueba actualmente aprobada por la FDA
- 1995 formato de tubo; 1999 formato micro-placa
• Diseñado para trabajar con una muestra de células
cervicales exfoliadas
• Kit recomendado incluye cepillo y medio de transporte de
la muestra
- Recoge células endo- y exocervicales
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
09
Análisis Hybrid Capture 2
• Sensibilidad de 5000 genomes/muestra
• Mezcla de bajo riesgo
- VPH tipo 6, 11, 42, 43, 44
• Mezcla de tipo de alto riesgo
- VPH tipo 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59
and 68
• Los resultados no son específicos del tipo
• No hay control de número de entrada de las células
• Buena comparación entra laboratorios
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
10
Reacción en cadena de polimerasa
• Muy sensible; cerca de 1-10 copias /100,000 células
• Permite realizar pruebas de diferentes tipos de muestras
• Permite el análisis de muestras de archivo con AND de baja
calidad
• Ensayos de consenso: objetivo general: región L1
- Conservado
- Primers varían:
MY09/MY11
SPF1/SPF2
PGMY09/PGMY11
GP5+/GP6+
- Sistemas de detección:
ELISA
dot blot
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
11
Diferentes metodologías de PCR
• Test AMPLICOR ® HPV
• Test LINEAR ARRAY® HPV
• Test genotipo INNO-LiPA ®
- Genotipado de VPH en tejido preparado en parafina
- Las secciones de tejido pueden ser muy viejas y están
sujetas a la degradación del ADN (incluso durante la
extracción)
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
12
Diferentes metodologías de PCR
• Formato de Chip de ADN de VPH
• HPV Microarray
• Citometría de flujo
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
13
Otras metodologías para detectar los tipos de
VPH
• Luminex’s xMAP® Technology
• Norchip - HPV Proofer
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
14
Limitaciones y Desafíos
• Ensayos de diversa gama
• Diferente sensibilidad y especificidad
• Falta de controles fácilmente disponibles, la garantía de
calidad y el control de calidad
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
15
Uso práctio de los métodos de prueba de
ADN del VPH
Clínico
• Tamizaje
• Triage de las pruebas de Papanicolau equívocas
• Sequimiento de displasia post-tratamiento
Epidemiología
• Vigilancia en zonas geográficas
- Prevalencia de VPH
- Prevalencia de genotipo de VPH
Vacuna
• Antes y después de la implementación de un programa de
vacunación
- Estudios de eficacidad de la vacuna
- Diferent regiones del mundo
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Slide
16
Gracias
Esta presentación está disponible en
www.uicc.org/curriculum
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
Descargar

Capítulo 2d: Análisis y tipificación del VPH