Colección, conservación y
transporte
de muestras
microbiológicas
María Cecilia Arango Jaramillo
Para desarrollar un estudio microbiológico
es necesario que previamente se
conozcan:






El propósito del estudio
Los objetivos
Las metodologías
Las variables
Los procedimiectos de
análisis
Las metas a alcanzar.
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TIPOS DE ESTUDIOS

Los estudios microbiológicos se
clasifican de acuerdo con sus objetivos
y el tiempo de ejecución en tres tipos:
– Estudios base
– Estudios de monitoreo
– Estudios de evaluación
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Estudios base

Permite un conocimiento global del
sistema y de las comunidades de
microorganismos.
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
Se considera que los ecosistemas
dulceacuícolas tropicales manifiestan
cambios ambientales y biológicos
considerables, dependientes de las
temporadas de sequía y lluvia.
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C O N D IC IO N E S A M B IE N T A L E S
FLUCTUANTES
E s tra te g ia r
María Cecilia Arango Jaramillo
C O N D IC IO N E S A M B IE N T A L E S
ESTABLES
E strateg ia
K
María Cecilia Arango Jaramillo
MONITOREO


Se extiende en el tiempo ( a través de
los años)
Su propósito: observar
periódicamente ecosistemas
susceptibles de cambios (positivos o
negativos), por alteraciones de
origen natural o antrópicas, tanto
puntuales como continuos.
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Permiten definir:
 Si la capacidad ambiental de un
ecosistema se está superando
 O
si los tensores están siendo
asimilados adecuadamente por estos
– (disolución, dispersión, mezcla,
descomposición, biodegradación,
oxidación u otros).

Así mismo, su implementación puede
darse para observar la recuperación
de ecosistemas deteriorados.
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Los programas de monitoreo
pueden llevarse a cabo para:
Valorar planes de manejo
ambiental
Evaluar efectos ambientales
Seguimiento continuo a procesos
industriales.
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Muestreos no programados deben hacerse:


Cuando ocurran cambios importantes
En caso de presentarse condiciones
anómalas que puedan conducir a
variaciones en la calidad del medio
(positivas o negativas).
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

A lo largo del programa de monitoreo,
se debe mantener contacto
permanente con el ecosistema bajo
estudio
Para no llegar a conclusiones
erróneas o falsas interpretaciones
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
El cotejo de resultados de un tiempo
con los ya existentes, permite inferir
cuales serán las condiciones futuras.
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Estudios de evaluación

Estos estudios tienen lugar cuando
condiciones de contaminación de
origen natural o antrópico, se
producen en forma esporádica pero
en magnitudes importantes,
causando un cierto deterioro del
ecosistema con cambios en la
comunidad de microorganismos.
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DISEÑO DE ESTUDIOS
MICROBIOLÓGICOS
Evaluación
preliminar
Elección de los microorganismos a muestrear
Elección de variables físico químicas
Muestreo
Ubicación de estaciones
Tipo y número de muestras
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Evaluación preliminar

La evaluación preliminar es
la etapa en la cual se
realiza la planificación del
estudio y requiere del
tiempo necesario para
aclarar todos los
interrogantes que se
presenten.
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Paralelamente se debe llevar a cabo
un reconocimiento del área con el
propósito de:
– Precisar los principales gradientes
ambientales naturales
– Las variables antropogénicas
presentes
– Un premuestreo es necesario para
definir los análisis que se harán y los
equipos de muestreo
– Definir el tratamiento numérico que
habrá de implementarse con cada
variable
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
La planeación de
detallada del estudio
evitará resultados inútiles,
sesgados o erróneos, o
incrementos no
programados de esfuerzo,
costos y tiempo.
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Validez de los resultados del
análisis de aguas
Dependen de
 El número de muestras que
adecuadamente representen el cuerpo
de agua o el efluente.
– Calidad estándar
– Límites permisibles

Sitios de muestreo y registros
previamente planeados y conocidos
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Recipientes para la toma de
muestras

Frascos de muestreo: 125 ml
como mínimo, tapa metálica hermética.

Limpieza:
1. Lavado con detergente y agua
caliente
2. Enjuague con agua caliente 3 veces
3. Enjuague con agua destilada
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
Agente desclorinizador.
– Para muestras tratatadas con cloro.
– Tiosulfato de Na al 10%, 0,1 ml por
frasco de 125 mlsuficiente para
neutralizar 15 mg de cloro.

Cobertura del frasco: papel Kraft,
aluminio o película plástica

Esterilización:
– Autoclave: 121°C por 15 minutos
– Calor seco 170°C por 2 horas
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Técnicas de muestreo



Primero las muestras de
estaciones menos contaminadas
 evitar contaminación cruzada
Nunca muestras compuestas
Aguas profundas: Botella Kemerer
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

Aguas superficiales: 15 - 30 cm de
profundidad
Siempre en contra de la corriente
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
Abrir el frasco sólo
en el momento del
muestreo

Llenado de frascos
hasta 2-3 cm antes
de la tapapara
agitar
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Identificación y manejo de
muestras
Características de las etiquetas:
 Limpias
 Impermeables
 Indelebles
 Fijas, pero fáciles de remover
 Tamaño suficiente para consignar los
datos
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
Muestras sin
etiqueta o con
etiquetas deficientes
no son aceptadas
en el laboratorio.
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N o m b re d e la en tid ad o d el
E stació n F ech a H o ra
No.
L o calizació n d e la estació n
T ip o d e an álisis a p racticar
T ip o d e m u estra
estu d io
M u estra N o .
C o lecto r
P rese rvativo
C o m en tario s
S ecret aría d e S alu d M u n icip io d e E l C arm en
E stació n F ech a
H o ra
M u estra N o .
No. 4
11-08- 01 13 :00
2
A n tes d e la b o cato m a Jairo P érez
C o lim etría co m p leta
P rese rvativo :
T io su lfato d e N a 10 %
S im p le
C u ltivo s
ab o n ado s
co n g allin aza h asta la
María Cecilia Arangoo
Jaramillo
rilla d e la q u eb rad a
Registro de datos de campo
R eg istro d e d ato s d e cam p o
H o ja N o . C o lecto res :
E stació n N ú m ero F ech a d e
H o ra
d e la
co lecció n T o m a E n treg a
m u estra
María Cecilia Arango Jaramillo
O tro s
R eg istro d e d ato s d e cam p o
H o ja N o . C o lecto res :
2 /2
J av ier T r ujillo y S an d r a P eláez
E stació n N ú m ero F ech a d e
H o ra
d e la
co lecció n T o m a
E n treg a
m u estra
A n tes
de
1 /3
2 8 - 08 - 01 8 :0 0
1 4 :3 5
la
O tro s
E p o ca d e lluv ia
B as ur as en el
es cuela
lech o
A lr ed ed o r es
abo n ad o s co n
g allin az a
A g ua tur bia
R iber as
er o s ion ad as
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Selección de sitios de muestreo
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Lago o represa (recreación)
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Abastecimiento de agua
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Río de orden mayor
60 m
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Muestreos en la red
Se necesita una
cobertura
sistemática para:
 Detectar averías
 Contaminación
cruzada
Frecuencia de la toma
de muestras:
 Tablas de la EPA
 Legislación vigente
 Standard Method
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Frecuencia del muestreo:
Decreto 475 de 1998, Calidad del agua potable
P o b la c ió n s e rv ida
2 5 a 1 .0 0 0
1 .0 0 1 a 2 .5 0 0
2 .5 0 1 a 3 .3 0 0
N ú m e ro
m í ni mo de
m u e s tra s
po r me s
1
2
3
Inte rv a lo
m á xi m o po r
m u e s tra s
c o ns e c utiv a s
M e ns ua l
Q ui nc e na l
C /1 0 día s
180
450
6 po r día
7 po r día
330
360
1 1 po r día
1 2 po r día
450
480
1 5 po r día
1 6 po r día


3 2 0 .0 0 1 a 4 50 .0 0 0
4 5 0 .0 0 1 a 6 00 .0 0 0


1 .2 3 0 .0 0 1 a 1.5 2 0 .0 0 0
1 .2 3 0 .0 0 1 a 1.5 2 0 .0 0 0


3 .0 2 0 .0 0 1 a 3.9 6 0 .0 0 0
3 .9 6 0 .0 0 1 o má s
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Toma de muestras en la red
Dejar correr
el agua
Flamear
Tomar la muestra
Si utiliza
preservativo, no
la deje rebosar
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Dónde tomar las muestras de la red?









Edificios municipales y públicos
Parques
Escuelas
Estaciones de gasolina
Teatros
Aeropuertos
Restaurantes
Plantas industriales
Residencias privadas
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Transporte de muestras


Refrigeradas, evitar que
el hielo las cubra
Fijarlas para evitar roturas
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Almacenamiento de muestras




0°C a 4°C
6-12 horas en refrigeración
30 horas aguas tratadas
< 6 horas aguas residuales
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Seguridad

Parte de la
confiabilidad
depende de la
vigilancia y
custodia de
las muestras


Ellas son la base
de obras o
acciones legales
Debe
demostrarse
posesión física o
registros
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
El colector
de las
muestras es
responsable
de ellas
hasta su
entrega en
el laboratorio
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El laboratorio:


Es responsable de las
muestras que se le
entreguen
Debe registrar su
entrada y los
resultados del análisis,
la fecha de entrega de
resultados y la de
destrucción de la
muestra
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

El laboratorio debe
utilizar métodos estándar
de acuerdo a la legislación vigente
Los laboratorios que analicen agua para
consumo humano deberán llevar un
programa de aseguramiento de la
calidad que garantice los resultados
(Decreto 475/98)
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

El coordinador
del estudio debe
recibir copia del
registro de
laboratorio.
El original
queda
archivado en el
laboratorio
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Para tener en cuenta


Manipule la muestra lo menos
posiblemuchos microorganismos
sufren estrés o mueren
Las muestras deben ser manejadas
por el menor número de personas
María Cecilia Arango Jaramillo
posible


Utilice técnicas de muestreo estándar
Use cuaderno de campo para registrar
datos de cada muestra
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L a d e la tapita ox id ad a e ra la
d e la e stación 2 o 3 ?
L a e staré confund ie nd o con
la m ue stra 12 que tie ne
la tapa rayad a?

Fije las etiquetas en el
campo antes de tomar
la muestra
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
Sitios de
muestreo y
polución visible
deben ser
registrados con
fotos
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El contacto con el laboratorio

Contacte un
laboratorio
especializado en
análisis
microbiológico de
aguas: garantiza
que tiene
estandarizados los
análisis

Hable con las
personas
encargadas sobre el
tipo de análisis que
necesitará, la
frecuencia de
muestreo, el
propósito y la
duración del estudio
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Averigüe en el laboratorio:
 Los días y horas en los que el laboratorio
recibe muestras para análisis
microbiológico.
 El número de muestras que le pueden
recibir simultáneamente
 Los requerimientos del laboratorio para la
entrega y procesamiento de muestras
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Análisis microbiológicos
corrientes:

Microorganismos heterótrofos:ufc/100 ml
Su presencia se utiliza para indicar la
eficiencia en la reducción de
microrganismos en procesos de
sedimentación, cloración, filtración
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
NMP coliformes totales: No. /100 ml
Su presencia significa que hay que tratar
el agua, pero no significa necesariamente
contaminación fecal.
Esta contaminación puede provenir del
suelo, el agua, etc.
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NMP coliformeds fecales : No. /100 ml
Significan contaminación fecal de
origen humano o animal.
Se debe buscar el origen, pero en
ambos casos puede haber
patógenos
Su número es igual o menos que el
de los coliformes totales
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NMP enterococos : No. /100 ml
Los estreptococos confirman
contaminación fecal cercana y reciente
Los estreptococos menos que los
coliformes

Enterovirus : No. Ufc (calvas)/ml

En estudios limnológicos se utiliza el
índice de saprobidad
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D ecr eto 475 d e 19 98, C alid ad d el ag u a p o tab le
T é c n ic a u tiliz a d a
M ic ro o rg a n is m o s F iltra c ió
S u s tra to d e fin id o
T u b o s m ú lt ip le s d e
in d ic a d o re s
n por
fe rm e n ta c ió n
m e m b ra
“ a c e p ta b le h a s ta e l
na
año 2000”
C o lifo rm e s
0
UF C 0
m ic ro o rg a n is m o s
< 2
3
3
to ta le s
/1 0 0 c m
/1 0 0 c m
m ic ro o r g a n is m o s
3
/1 0 0 c m n e g a tiv o
E s c h e ric h h ia c o li 0
UF C 0
m ic ro o rg a n is m o s N in g u n a m u e s tra
3
3
/1 0 0 c m
/1 0 0 c m
d e a g u a p o ta b le
d e b e c o n te n e rla e n
u n a m u e s tra d e 1 0 0
3
cm
in d e p e n d d ie n te m e
n te d e l m é to d o
Se recomienda
un valor máximo de 100 UFC /100 cm3, para
microorganismos mesófilos, como prueba
complementaria de calidad microbiológica del agua
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Control de calidad microbiológica del
agua potable:
 Libro de registro de calidad del agua
% A cep tab ilid ad =
Na
X 100
Nt
Na
=
Nú m e ro
de
m u e s tra s
a c e p ta b le s :
c u m p le n
con
re q u is ito s A rt 2 5
N t = Nú m e ro to ta l d e m u e s tra s
p o r m e s : to ta l d e m u e s tra s
a n a liz a d a s y re g is tra d a s
María Cecilia Arango Jaramillo
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Colección, conservación y transporte de muestras