Pruebas
Inmunológicas en
Enfermedades
infecciosas
Dr. Carlos Díaz Olachea
2005
Pruebas Inmunológicas
en Enfermedades
infecciosas
Termino aplicado en Patología Clínica a la
metodología empleada en la detección de
enfermedades infecciosas pueden ser:
Detección de Antígenos directos
Detección de la respuesta inmune
(Anticuerpos ó células sensibilizadas) del
huésped al antígeno específico
Detección indirecta de respuesta inmune a
otros antígenos( Reacción cruzada)
Pruebas Inmunológicas en
Enfermedades infecciosas
Se describen ejemplos más frecuentes:
ASLO
Diagnóstico de EBV
Reacciones Febriles
Rotavirus
H. Pylori
Otras que se discutirán en la sección
especifica del programa son:





Infecciones virales exantemáticas
Hepatitis viral
TB
Hongos
Etc.
Antiestreptolisinas O
(ASLO)
Son anticuerpos contra estreptococo beta
hemolítico del grupo A
Indican solo exposición al Estreptococo beta
hemolítico del gpo. A
Aparece a la semana de infección, pico
máximo a las 3 semanas
Utilidad clínica asociada a complicaciones
secundarias del estreptococo como
Escarlatina, F. Reumática, Glomérulo nefritis,
Endocarditis bacteriana.
NO es específico
Antiestreptolisinas O
(ASLO)
técnica:
Inhibición de la hemoaglutinación
Aglutinación látex
Valores de referencia:




Adultos
< 160 U/ml Todd
< de 2 años
< 50
de 2 a 4 años
< 160
de 4 a 12 años
entre 160 – 300
Alterados por esteroides, uso de antibióticos
y beta lipoproteína
Substituida por pruebas rápidas
EBV
Manifestación clínica primaria: Faringitis y Linfocitosis,
Esplenomegalia ó Hepatitis y Fiebre prolongada.
Normalmente en < de 10 años, subclínica
Adolescencia MI (Fiebre glandular) 4-7 semanas de
incubación, inicio insidioso, fiebre fluctuante, faringitis,
linfadenopatía y hepato esplenomegalia.
Dura varias semanas, raro meses.
90% de adulto tienen Acs. Contra el
Reactivación:
 Eliminación de virus en saliva
 Linfoproliferación B
 Inmunosupresión y linfoproliferación
 Neumonitis y afectación de SNC es raro.
ÉBV Infección Latente
LCT
Replicación
L NK
En inmunodepresión aparece:
Mononucleosis Infecciosa
Linfomas tipo Hodking,
Linfomas Inmunoblasticos
Linfomas Burkitt´s
CUCI
Etc.
EBV Diagnóstico
Cuadro Clínico de presentación
Citometria hematica con linfocitosis atípicos >
30%, neutropenia y trombocitopenia
ocasional
Enzimas hepáticas elevadas
Acs. Heterofilos (monotest, mospot)



Acs. Que dan reacción cruzada co GR de carnero
y caballo. Especificidad de 95%
Positiva en : 30% niños < 2 años y > 2 a 4 años
90% . Japoneses negativa
Falsos positivos en Linfoma y enfermedades
autoinmunes.
Títulos de Acs. Específicos IgM
PCR
EBV Diagnóstico
Componentes virales:



Antigeno del capside (VCA) IgG e IgM (+) en
enfermedad temprana
Antigeno temprano (EA) (+) en enfermedad
temprana y convalecencia
Antigeno nuclear (NA) (+) en convalecencia y
reactivación crónica
El VCA es producido por linfos B infectados
se encuentra en citoplasma, el IgM se
encuentra a las 4 – 7 días de infección a
conc. Bajas desaparece a los 2 – meses
Ideal PCR carga viral
Las Reacciones Febriles
Pruebas de laboratorio
• Grupo de pruebas de aglutinación de
antígenos bacterianos por anticuerpos
presentes en el suero de pacientes con
enfermedades infecciosas no relacionadas.
• Reacción de Widal
• Reacción de Hudleson
• Reacción de Weil Felix
• Tularemia
Reacciones Febriles
Metodología
• Uso de suspensiones de bacterias tratadas (atenuadas)
previamente identificadas.
• Suero de paciente
• Placas ó tubos
• Observación de aglutinación
• Actualmente se agrega a algunas un medio de
identificación macroscópica como el Rosa de Bengala
Reacción de Widal
• Diseñadas para infecciones por Salmonella
• S. Tiphy
• S. Enteritidis
• Antígenos
– Tifico O Somático
– Tifico H
Flagelar
– Vi
– Paratifico A
– Paratifico B
– Antígeno C
– Antígeno E
– Sin embargo todos los antígenos dan reacciones cruzadas
en zonas endemicas.
Interpretación
• Títulos de Tifico O de 1:160 ó mayores
• Títulos de Tifico O, H, Paratifico A ó B que
aumenten 3-4 veces el valor inicial en 2 ó
más determinaciones en el transcurso de la
enfermedad, en zonas endémicas.
• Zona NO endémica cualquier título es
positivo.
Reacción de Widal
Falsas positivas
• Inmunización previa con
vacuna tifoidica
• Hepatitis aguda y crónica
• Endocarditis
estreptococcica
• Brucelosis
• Infección por bacterias
Gram negativas
• Salmonelosis
Falsas Negativas
Falta de respuesta
inmune en el 30% de
los casos
Uso de antibióticos
que inhibe la
respuesta inmune
Tiempo inadecuado
para la determinación
(lo más frecuente)
falta de
estandarización
comercial de los
antígenos.
Error de laboratorio (
fenómeno de Zona)
Reacción de Widal
Conclusiones
•
•
•
•
•
No substituye los cultivos
No es específica
No estandarizada
Difícil interpretación
La negatividad no descarta la
enfermedad
Reacción de Hudleson
• Después del cultivo son las pruebas más
específicas para el diagnóstico de
Brucelosis.
• De las reacciones febriles son las más útiles
y confiables
Reacción de Hudleson
• Se utiliza una suspensión de Brucella
Abortus para la investigación en suero del
paciente anticuerpos contra las tres especies
comunes de Brucella: Suis , Mellitensis y
Abortus.
• Métodos usados son: Aglutinación en placa,
tubo, IEA, ELISA.
Reacción de Hudleson
Interpretación
• Títulos de 1:160 ó mayores son diagnósticos en
zonas endémicas
• Para Banco de sangre en donadores sanguíneos
cualquier título es positivo.
• Los títulos ascenderán en 2 ó más
determinaciones durante la enfermedad.
• Un resultado negativo no descarta el diagnóstico.
Reacción de Hudleson
• Los anticuerpos aparecen en relación a la
bacteremia y alcanzan títulos altos (miles)
• Al alcanzar el nivel máximo puede ocurrir:
– Disminución gradual con desaparición en 6 meses a un
año.
– Normalizarse y luego ascender
– Producir espigas intermitentes sin normalización
– Negativizarse por bloqueo (zona)
Reacción de Hudleson
Falsas positivas
Memoria
inmunologica
Reacción cruzada
con otras
enfermedades
Idiopatica
Error de
laboratorio
falsas negativas
• Respuesta inmune
inadecuada (30%)
• Fenómeno de zona
• Anticuerpos
bloqueadores
• Uso de antibióticos
• Defectos técnicos
Reacción de Weil Felix
• Son pruebas de aglutinación catalogadas
como NO específicas, porque la intención de
la prueba es la búsqueda de anticuerpos
contra ciertas cepas de bacterias del tipo del
Proteus.
• La reacción clásica utiliza cepas de Proteus
OX19, Proteus OXK, Proteus OX2.
Reacción de Weil Felix
• En las Rikettsiosis los anticuerpos
aumentan en la 2da. Semana y alcanzan su
máximo en la 3a. Y 5ta semana y
desaparecen en 1 a 2 meses.
• Aumentos de los títulos de 2 a 4 veces en 4 a
7 días de diferencia es la base del
diagnóstico.
• Los títulos siempre son altos > 1000
Reacción de Weil Felix
Falsas Positivas
Infecciones por
Proteus,
predominantes en
vías urinarias .
Reacción cruzada
con otras
enfermedades
infecciosas y auto
inmunes.
Falsas Negativas
Falta de respuesta
Inmune
Uso de Antibióticos
Rotavirus
Norwalk virus
Afecta más de 130 millones de niños anualmente
en el mundo y produce una mortalidad de 1
millon. (ASM News 64, 1998)
La detección de antigenos en heces en niños de 2
meses a 3 años causa más común de diarrea ( 3040% de las GEV).
Contaminación oro-fecal
Solo útil en periodo agudo de diarrea inicio de
síntomas 4 –48h.
Em Mayores de 3 años 90% tienen Acs. IgG.
Sensibilidad 100% y VPP amplio de 57.7 93.7 %
Journal of Clinical Microbiology, December 2001, p. 4532-4534, Vol. 39, No. 12
MMWR, 3/99, Vol. 48.
Pediatric Infectious Disease Journal. 22(9):808-814, September 2003
TABLE 1. Summary of results
No. of results that were:
NP
Sensit Specif
PP
V
Test
ivity icity
V
Concorda Concorda False(%)False(%) (% (%)
)
ntly
ntly
negat positi
positive negative
ive
ve
EM
14
378
1
0
93.3 100.0 99. 100
0
73 .00
Pathfind
15
367
0
11 100.0 79.10 10 57.
er
0
0.0 70
rotavirus
0
Ridascre
15
377
0
1
100.0 99.73 10 93.
en
0
0.0 74
rotavirus
0
Rotavirus
Prueba ( ICG )
inmunocromatografica
Positivo
Negativo
Sensilidad 100%
Especificidad 97.3%
Helicobacter Pylori
El Helicobater pylori (H.pylori) es una bacteria microaerófila, espiroidea,
que coloniza primeramente la mucosa gastrica antral, donde produce una
inflamación aguda y crónica denominada gastritis crónica activa.
El nicho ecológico en los seres humanos parece estar restrigido al
estómago y al duodeno.
Fue descubierto por Marshall y Warren hace más de 20 años y es
reconocido como uno de los patógenos más comunes y médicamente
más importantes de todo el mundo.
El Helicobacter pylori es una infección común, donde el 50% de los
adultos de mediana edad han sido infectados con ella. Tiende a
propagarse entre personas que viven juntas, que comparten la comida y
los baños.
Se diagnostica por exámenes de laboratorio como: * Análisis de sangre.
*Análisis de aliento de urea.
*Análisis de heces.
*Endoscopía.
Helicobacter Pylori
Después de infectarse con H.pylori la mayoría de las
personas desarrolla gastritis, una inflamación del
revestimiento del estómago. Sin embargo la mayoría de las
personas nunca tienen síntomas o problemas relacionados
con la infección, cuando los síntomas estan presentes
pueden incluir:
Dolor sordo
Pérdida de peso.
Pérdida de apetito.
Pesadez de estómago.
Eructos.
Náuseas.
Vómitos
Pruebas inmunocromatografica
para Suero y heces
Pruebas inmunocromatografica
para Suero y heces
Pruebas inmunocromatografica
para Suero y heces
HELICOBACTER PYLORI EN
ALIENTO
Principio de la prueba
Consiste en administrar al paciente una cápsula conteniendo
urea marcada con Carbono (C 14) 14; en presencia de H. pylori
la urea marcada se convierte en amonio e ión de bicarbonato, el
cual lleva el carbono marcado. Más tarde pasa la circulación y
es excretada a través de los pulmones.
La prueba de aliento con urea implica le recolección de una
muestra de aliento 15 minutos después de beber una solución
con C 14. si H. pylori está presente, su enzima ureasa
hidrolizará la urea en CO2, que finalmente será excretada en el
aliento. Pueden presentarse resultados negativos falsos si la
prueba se hace dentro de la semana siguiente de haber tomado
inhibridos de bomba de protones, bismuto o antibióticos, o
después de una cirugía gástrica.
Comparación de
métodos
Espécimen
Sensibilidad Especificidad
%
%
VPP
%
VPN
%
Prevalencia
%
Heces
94.87
95.33
69.81 99.39 10.20
Suero
50
82.96
13.88 96.79 5.2
93.42
16.6
Aliento 9.09
87.65 12.64
En Lab del HSJ-2005
Evaluación de Artritis
Pcr ó VSG
Factor Reumatoide
Tipo de HLA
ANA
Pruebas para LES
Anti DNA y Sm
Complemento
Citometría Hematica
Química sanguinea
Artritis Reumatoide
• La AR se caracteriza por ser
crónica, bilateral y simétrica,
erosión articular y periarticular,
nódulos subcutáneos, vasculitis.
• Asociación con DR4 y DR1
• Marcadores:
–
–
–
–
Factor reumatoide
Anticuerpo antiqueratina
Factor antiperinuclear
Anticuerpos asociados a antígeno
nuclear (RANA)
– Anti RA33
Artritis Reumatoide
• Inflamación de tres ó más articulaciones pos > 6
semanas
• Inflamación de muñecas, cadera ó rodillas por > 6
semanas
• Dolor e inflamación matutina por una hora y por
>6 semanas
• Cambios en manos y radiografías de AR ( erosión y
descalcificación )
• Nódulos reumatoides
• Factor reumatoide positivo ( normal en 5 %)
• Se requieren al menos 4 criterios.
• Arnett et.al. Arth. Rheum 30:S17, 1987)
Artritis Reumatoide
Factor reumatoide (FR):
• Ig tipo IgM(IgA ó IgG) anti fracción Fc de
la IgG.
• Detección por aglutinación, Elisa,
Nefelometría.
• FR se asemeja la proteína A de
estafilococo aureus
• Positivo en
– 50-90% de AR
– 75% de SS
– 60% MCTD
– 35% LES
Positivo
Negativo
Factor reumatoide por aglutinación
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Antiestreptolisinas O (ASLO)