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Es una técnica que hace uso de dos anticuerpos; el
anticuerpo primario es el que reconoce y se une a al
molécula diana, mientras que el secundario que es el que
se encuentra marcado con el fluoróforo, reconoce al
primario y se une a él .
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Las pruebas de inmunofluorescencia indirecta son de gran
utilidad en medicina clínica. Se utilizan, por ejemplo para
el diagnostico serológico de la toxoplasmosis, la sífilis, la
varicela zoster, y de otras muchas enfermedades.
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Esta técnica permite la detección de anticuerpos
circulantes.
En la primera etapa se fijan sobre un portaobjetos los antígenos que
constituyen el substrato, sobre él se coloca el suero problema, si la
reacción es positiva se dará la formación de complejo Ag – Ac, no
visible ya que el anticuerpo no estaba marcado.
En la segunda etapa se agrega una anti -inmunoglobulina humana
marcada, que reaccionará con el anticuerpo del complejo producido
en la primera etapa.
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Muestra:
Suero problema.
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Reactivos:
-Preparación de las láminas impregnadas con el antígeno que
se desee estudiar.
-PBS (Buffer fosfato salino).
-Conjugado (suero anti-inmunoglobulina humana marcada con
isotiocianato de fluoresceína).
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Materiales:
-Pipetas desechables.
-Tubos de ensayo.
-Agitador.
-Cámara húmeda.
- Filtro de papel.
-Cubreobjetos.
-Medio de montaje.
-Microscopio de fluorescencia.
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La lectura se hace con un
microscopio
de fluorescencia cuya luz
excita al isotiocianato de
fluoresceína haciendo que
emita luz verde. La
observación de esta luz
verde emitida por un
objeto del portaobjetos
indica la presencia de
anticuerpo específicos en
el suero.
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INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA