APLICACIONES
CLÍNICAS DE LA
ESPECTROMETRIA DE
MASAS
Mª Jesús Maza Castillo
Residente 1º Análisis Clínicos
Hospital Universitario de Guadalajara
25 Abril 2007
-
1.Detección de Helicobacter
pylori
-
2.Evaluación de la función
pancreática exocrina
DETECCIÓN DE Helicobacter pylori
1. ¿QUÉ ES?
-Bacilo gram
negativo que se
encuentra en la
mucosa gástrica
asociado a distintas
enfermedades
digestivas
CARACTERISTICAS
-MÓVIL
-FORMA ESPIRAL
-UREASA POSITIVA
-Catalasa y oxidasa positivo
-Vive en mucosa gástrica antral
-Libre en mucus, en la superfície de las células
epiteliales o en el intersticio celular
-NO es invasivo
-NO se ha aislado en hemocultivos
2. HISTORIA
Robin Warren y Barry Marshall
-1982 – Demuestran que la principal
causa de la úlcera péptica y gástrica
es Helicobacter pylori
-2005- Premio Nobel. “ La bacteria
que destronó al estrés”
3. EL POR QUÉ SE SU IMPORTANCIA
PATOLOGÍA
DOS RAZONES
TRATAMIENTO
“Las infecciones por H.pylori afectan
aproximadamente a la mitad de la población
mundial”
Helicobacter pylori
Vasculares
Autoinmune
ExtradigestivasInfiltrado
Dermatológicas
Encefalopatias
MALT
inflamatorio
PMN
prominentes
Diabaetes
mellitus
Gastritis central
superficial
Gastritis atrófica
autoinmune (tipo A)
Gastritis central
difusa
Linfoma
Ulcera duodenal
RR=3.8
Cáncer
difuso
Gastritis atrófica
multifocal (tipo B)
Cáncer
intestinal
Úlcera
gástrica
MECANISMOS POR LOS CUALES H. Pylori
LESIONA LA MUCOSA GÁSTRICA
Sustancias externas
Lipopolisacárido
Urea+ H2O
Ureasa
CO2 + 2NH4+
Actividad citotóxica
Daña la
microcirculación
Induce apoptosis
Endotoxina
4. DIAGNÓSTICO
INVASIVOS
-CULTIVO
DIRECTOS
-HISTOLOGÍA
NO INVASIVOS
-TÉC.MOLECULARES.( Jugo
pancreático, saliva o heces)
-TÉC.MOLECULARES -ANTÍGENO EN HECES
(PCR)
-PRUEBA DEL ALIENTO
INDIRECTOS
-UREASA RÁPIDA
(con urea *C13)
-SEROLOGÍA
SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD
S(%)
E(%)
97
94.1
HISTOLOGÍA
98.2
100
CULTIVO
77.4
100
TEST DE ALIENTO
95.5
93.5
SEROLOGÍA- ELISA
91
50
ANTÍGENOS EN HECES
89.5
77.8
UREASA RÁPIDA
PRUEBA DEL ALIENTO.
“DETERMINACIÓN DE 13CO2 EN EL ALIENTO”
“Prueba estándar entre las
pruebas diagnósticas no invasivas
de infección por Helicobacter
pylori”
TAU (Test
de Urea
Marcada) marcada
Test
de
la
urea
*
CO
2 espirado
(13CO2/CO2)m - (13CO2/CO2)c
x 1000
 o/oo =O---------------------------------------UREASA
(13CO2/CO2)m
UREASA
*
CO
2
*
CO
NH2 *C
2
sangre
*CO2 + 2NH4+
NH2
NH
*C = O
NH
2
2
Ureasa
* CO
+
2
+ NH
4
1.PROCEDIMIENTO PARA LA REALIZACIÓN DEL TEST
Sobre de ácido
cítrico
Comprimido de
urea (*C)
2 tapones
verde (basal)
Tubos de recogida de muestra
2 tapones blanco
(post)
1.Muestra Basal
200ml AGUA + AC.CÍTRICO
10 MIN
2 tubos
2.Muestra Posterior
+
125 ml AGUA + UREA
(Comprimido)
30 MIN
2 tubos
2.ANÁLISIS DE LA MUESTRA
-Los valores corresponden a la relacción
13CO /CO en el aire espirado y el resultado se
2
2
expresa como “enriquecimiento isotópico” 
(13CO2/CO2)m - (13CO2/CO2)c
 o/oo= ---------------------------------------- x 1000
(13CO2/CO2)c
2. δ Post
1. δ Basal
o/
o/
oo
 Post
o/
oo
oo
 Basal
o0/
oo
RESULTADOS
Si  < 5
Si  > 5
oo
Negativo
oo
Positivo
o/
o/
Paciente 1
1. Basal
2. Post
 -23.74
1.27 < 5
 -22.47
Negativo
-22.39 91.67 > 5
69.28
Positivo
o/
o/
oo
oo
Paciente 2.
1. Basal
2. Post
Falsos negativos
-Realización de la prueba antes de 4 semanas de
finalizar el tratamiento erradicador
Tratamiento con inhibidores de la bomba de protones
o sales de Bismuto en el momento de la prueba o dias
previos
Vaciamiento gátrico rápido
Realización de la prueba en las 4 h después de la
endoscopia
Falsos positivos
Producción de ureasa por otros bacterias en pacientes
aclohídricos.(gastritis crónica atrófica)
Recoger las muestras antes de tiempo.
Recoger las muestras demasiado tarde. Elevación por la
acción hidrolítica sobre la urea de la flora bacteriana.
EVALUACIÓN DE LA FUNCIÓN
PANCREÁTICA EXOCRINA
Fisiología del páncreas
1. Endocrino
PÁNCREAS
2. Exocrino
- Porción enzimática
- Porción acuosa
Digestión de carbohidratros,
proteínas, lípidos
conversión en moléculas
absorbibles
Pancreatitis crónica
Proceso inflamatorio progresivo e
irreversible caracterizado por la fibrosis de
la glándula con destrucción del parénquima
exocrino en la primera fase y en una
segunda fase del parénquima endocrino
-
-Malabsorsión por afectación del páncreas
exocrino, (esteatorrea, creatorrea), y en fases
avanzadas , diabetes mellitus
1.Clasificación: ( Marseille –Rome)
1. Pancreatitis Crónica calcificante
Alcohol
2. Pancreatitis crónica obstructiva
Obstrucción del conducto pancreático
principal
3.Pancreatits inflamatoria
Fibrosis densa e infiltrado inflamatorio
mononuclear
3. Sintomatología:
1. Dolor crónico (80%): Dolor continuo abdominal de
intensidad moderada.
2. Diarrea y pérdida de peso: Inadecuada digestión de
los alimentos y la imposibilidad del
organismo para asimilarlos.
Desnutricion progresiva
4. Diagnóstico:
-Pruebas de imagen:
Radriografía, Ecografía, Ultrasonidos,...
-Pruebas de función pancreática exocrina.
-Métodos con intubación duodenal: Jugo pancreático
-Métodos sin intubación duodenal:
- Niveles de enzimas en suero
- CUANTIFICACIÓN DE LA GRASA FECAL(VAN DE
KAMER) ( ↑ S y E)
- Cuantificación de quimiotripsina fecal
- Cuantificación de elastasa fecal
- Prueba del pancreolauril
- Prueba de bentiromina
- TEST DE TRIGLICÉRIDOS MIXTOS.TEST DE
ALIENTO
APLICACIONES CLÍNICAS
-Detectar decrementos en la actividad de la lipasa
intraduodenal.
-Seguimiento de la evolución de la enfermedad
pancreática ( este test es más sensible que el
estudio de esteatorrea, ya que esta no se produce
hasta que la producción de lipasa es menor del
10%.
-Monitorización del efecto del tratamiento
Fundamento:
Se basa en marcar con 13C distintos sustratos que
requieren la
participación de enzimas
pancreáticas para su escisión y
absorción.
Los niveles de 13CO2 en aire espirado nos
permitirán valorar la
actividad enzimática del
páncreas.
REPRESENTACIÓN DEL TEST DE ALIENTO CON TG MIXTOS
MARCADOS
1,3 diesteraril-2-13C-carboxil-octanoil glicerol
G
L
I
C
E
R
O
L
C20
13C
8
C20
G
L
I
C
E
R
O
L
C20
13C
8
C20
Absorción intestinal
Lipasa pancreática
13C
8
13CO
2
Respiración
Oxidación hepática
+
G
L
I
C
E
R
O
L
50 tubos: 2 basales + 48 posteriores
COMIDA DE PRUEBA (13C-Triglicéridos
Mixtos)
Ingredientes
Mantequilla (20 gramos)
Biscottes (15 gramos)
Agua (200 mL)
Modo de preparación
Untar la mantequilla en ambos biscottes
Añadir los 250 mg de 13C-Triglicéridos en
la mantequilla
PROTOCOLO DEL TEST DEL ALIENTO
1.
2 tubos
+
10mg
METOCLOPRAMIDA
BASALES
10 min
2.
COMIDA DE
PRUEBA:
Biscotes,
mantequilla,
13C-TG mixtos
CADA 15 MINUTOS
DURACIÓN: 6HORAS
48 tubos
POSTERIORES
ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS
-Los valores corresponden a la relacción
13CO /CO en el aire espirado y el resultado
2
2
se expresa como “enriquecimiento
isotópico” 

o/
oo
13CO /CO )m - (13CO /CO )c
(
2
2
2
2
= ---------------------------------------x 1000
(13CO2/CO2)c
Resultados: % de 13C-recovery/h y valores acumulados durante 6 h. Se
calcula utilizando un programa matemático que calcula el porcentaje de
sustracto recuperado como 13CO2
HOS P IT AL GE NE RAL UNIVE RS IT ARIO DE GUADAL AJ ARA
UNIDAD DE INVE S T IGACIÓN
NEGATIVO
NEGATIVO
Test de Función Pancreática Exocrina 13C-Mixed-Triglyceride-Test (13C-MTG)
Calvino Fernández, Miryam
Tiempo (min)
0
15
30
45
60
75
90
105
120
135
150
165
180
195
210
225
240
255
270
285
300
315
330
345
360
Fecha de nacimiento: 02/11/1979
Diagnóstico:CONTROL
Delta
-25,68
-24,17
-22,69
-22,54
-22,51
-22,01
-21,23
-20,57
-18,50
-17,18
-16,62
-17,30
-17,80
-18,08
-19,01
-19,59
-20,10
-20,48
-20,98
-21,05
-21,53
-22,01
-22,04
-22,40
-22,71
%13C
1,08301
1,08467
1,08629
1,08646
1,08649
1,08704
1,08790
1,08862
1,09090
1,09235
1,09297
1,09222
1,09167
1,09136
1,09034
1,08970
1,08914
1,08872
1,08817
1,08810
1,08757
1,08704
1,08701
1,08661
1,08627
Resultado:
% Dosis/h
0,00
2,45
4,86
5,10
5,15
5,96
7,23
8,30
11,67
13,81
14,72
13,62
12,80
12,35
10,84
9,90
9,07
8,45
7,64
7,52
6,74
5,96
5,91
5,33
4,83
% Dosis acum
0,00
0,61
2,44
4,93
7,49
10,27
13,57
17,46
22,45
28,82
35,95
43,03
49,64
55,93
61,72
66,91
71,65
76,03
80,05
83,84
87,40
90,58
93,55
96,36
98,90
Pico:
14,7
Tmax:
150
% Dosis acumulada:
98,9
NORMAL
Valores normales: %Dosis acumulada
%
min.
%
> 58%
Dosis:
Peso:
Talla:
BSA:
16,00
250
55,00
170,00
1,60
mg
kg
cm
m2
120,00
% Do s is / h
% Do s is acum
14,00
100,00
12,00
80,00
10,00
8,00
60,00
6,00
40,00
4,00
20,00
2,00
0,00
0
30
60
90
120
150
180
210
240
Mi nutos
Guadalajara a 24 de junio de 2003
270
300
330
0,00
360
% cum Dosis
Nº Laboratorio:7
NHC:NO CONSTA
% Dosis/h
Nombre:
HOS P IT AL GE NE RAL UNIVE RS IT ARIO DE GUADAL AJ ARA
UNIDAD DE INVE S T IGACIÓN
POSITIVO
Test de Función Pancreática Exocrina 13C-Mixed-Triglyceride-Test (13C-MTG)
Nombre:
NHC:NO CONSTA Fecha de nacimiento: NO CONSTA
Delta
-23,44
-23,68
-23,71
-23,73
-23,71
-23,69
-23,70
-23,51
-23,36
-23,31
-23,40
-23,46
-22,20
-23,27
-23,44
-22,84
-22,87
-22,89
-22,65
-23,12
-21,94
-22,09
-23,52
-22,17
-21,95
%13C
1,08547
1,08520
1,08517
1,08515
1,08517
1,08519
1,08518
1,08539
1,08556
1,08561
1,08551
1,08545
1,08683
1,08566
1,08547
1,08613
1,08609
1,08607
1,08634
1,08582
1,08712
1,08695
1,08538
1,08686
1,08711
Resultado:
% Dosis/h
0,00
-0,42
-0,47
-0,50
-0,47
-0,43
-0,45
-0,12
0,14
0,23
0,07
-0,03
2,15
0,30
0,00
1,04
0,99
0,95
1,37
0,56
2,60
2,34
-0,14
2,20
2,59
% Dosis acum
0,00
-0,10
-0,33
-0,57
-0,81
-1,04
-1,26
-1,40
-1,40
-1,31
-1,23
-1,22
-0,69
-0,08
-0,01
0,25
0,76
1,25
1,83
2,31
3,10
4,33
4,89
5,40
6,60
Pico:
2,6
Tmax:
300
% Dosis acumulada:
6,6
PATOLÓGICO
Valores normales: %Dosis acumulada
%
min.
%
> 58%
Dosis:
Peso:
Talla:
BSA:
12,00
250
65,00
160,00
1,71
mg
kg
cm
m2
70,00
% Do s is / h
% Do s is acum
60,00
10,00
50,00
8,00
40,00
6,00
30,00
4,00
20,00
2,00
10,00
0,00
0
30
60
90
120
150
180
210
240
270
-2,00
300
330
0,00
360
-10,00
Mi nutos
Guadalajara a 10 de julio de 2003
% cum Dosis
Tiempo (min)
0
15
30
45
60
75
90
105
120
135
150
165
180
195
210
225
240
255
270
285
300
315
330
345
360
Diagnóstico:Pancreatitis alcohólica
% Dosis/h
Nº Laboratorio:16
HOS P IT AL GE NE RAL UNIVE RS IT ARIO DE GUADAL AJ ARA
POSITIVO
UNIDAD DE INVE S T IGACIÓN
TRAS TTO CON KREÓN
Test de Función Pancreática Exocrina 13C-Mixed-Triglyceride-Test (13C-MTG)
Nombre:
Delta
-22,33
-22,35
-22,41
-21,92
-20,95
-19,78
-19,36
-19,46
-20,05
-19,92
-19,8
-20,19
-20,14
-20,34
-20,51
-20,16
-20,23
-20,24
-20,45
-20,49
-20,24
-20,42
-20,59
-20,56
-20,74
%13C
1,08669
1,08667
1,08660
1,08714
1,08821
1,08949
1,08995
1,08984
1,08920
1,08934
1,08947
1,08904
1,08910
1,08888
1,08869
1,08907
1,08900
1,08899
1,08876
1,08871
1,08899
1,08879
1,08860
1,08863
1,08844
% Dosis/h
0,00
-0,03
-0,14
0,71
2,39
4,43
5,15
4,98
3,96
4,18
4,39
3,71
3,80
3,45
3,16
3,77
3,64
3,63
3,26
3,19
3,63
3,31
3,02
3,07
2,76
% Dosis acum
0,00
-0,01
-0,05
0,09
0,87
2,57
4,97
7,50
9,74
11,77
13,91
15,94
17,82
19,63
21,28
23,02
24,87
26,69
28,41
30,02
31,73
33,46
35,05
36,57
38,03
Dosis:
Peso:
Talla:
BSA:
250
65,00
160,00
1,71
mg
kg
cm
m2
6,00
40,00
35,00
5,00
30,00
4,00
25,00
3,00
20,00
15,00
2,00
10,00
1,00
5,00
0,00
0
30
60
90
120
150
180
210
240
270
300
330
% Do s is acum
-1,00
Mi n u tos
Resultado:
Pico:
%
Tmax:
min.
% Dosis acumulada:
38,0 %
PATOLÓGICO
Valores normales: %Dosis acumulada > 58%
3600,00
% Do s is / h
Guadalajara a 17 de Noviembre de 2003
-5,00
% cum Dosis
Tiempo (min)
0
15
30
45
60
75
90
105
120
135
150
165
180
195
210
225
240
255
270
285
300
315
330
345
360
Diagnóstico:Tratamiento con Kreón
% Dosis/h
Nº Laboratorio: 6B La Palma
“ BUENA ALTERNATIVA A LAS TÉCNICAS
TRADICIONALES”
VENTAJAS
PACIENTE
INVESTIGADOR
- No invasivo
-Fácil conservación
-Recogida de muestra
-Manejo
sencilla
-Análisis de las
muestras
- No radioactivo (13C)
-Realización del test en
mujeres fértiles,
embarazadas, niños y
ancianos
-No instalaciones especiales:
Espectrometria de masas
(13CO2)
FALSOS POSITIVOS:
 Vaciamiento gástrico
retrasado
 Daño extenso de la mucosa
intestinal (celíacos, enfermedad
de Crohn)
 Tiempo de contacto corto
entre la comida de prueba y las
secreciones pancreato-biliares
(pacientes gastrectomizados)
 Diabetes y enfermedad
hepática severa
FALSOS NEGATIVOS:
Enfermedad pancreática
moderada
-Este test es capaz de detectar disfunción
pancreática incluso en ausencia de
esteatorrea, así como de diferenciar si la
esteatorrea está asociada o no a enfermedad
pancreática
(La esteatorrea se produce si la lipasa cae
por debajo de 40KU/h. )
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Aplicaciones clínicas de la espectrometria de masas.