TRABAJO PRÁCTICO N° 2
•MEDIOS DE CULTIVO
• SIEMBRA Y TRANSPLANTE
Lic.Soria Josè
MEDIOS DE CULTIVO.
• Definición: es toda preparación artificial, sólida,
semisólida o líquida que suministra al microorganismo
cada una de las sustancias fundamentales, una fuente
de energía y condiciones ambientales adecuadas para
el desarrollo y la supervivencia del microorganismo.
• CULTIVOS: son las poblaciones de microorganismos
que se obtienen en los medios de cultivo.
• Los cultivos pueden ser:
• a) puros o axénicos
• b) mixtos
Un solo tipo de microorganismo
Varios tipos de microorganismo
Existe gran diversidad de condiciones químicas y
físicas en las cuales puede ocurrir el crecimiento
microbiano, pero siempre se requieren una fuente
de energía y una fuente de carbono
Clasificación de Microorganismo según su
fuente de energía y fuente de carbono
Composición de los medios de cultivos
• 1. Elementos energéticos y constitutivos
a) Macro elementos
b) Micro elementos o trazas
c) Factores de crecimiento
• 2. Agua
• 3. Agentes solidificantés:
1. Elementos energéticos y constitutivos
a) Macro elementos
Fuente de Carbono
CO2 para autótrofos,
azúcares para heterotrofos
“Se necesita el carbono para la construcción de muchas moléculas necesarias para la célula”
NO3-, NH3 ó N2.
(autótrofos)
Fuente de nitrógeno
Aminoácidos y proteínas
“El nitrógeno es metabolizado para proveer proteínas, ácidos nucleicos y polímeros de pared”
1. Elementos energéticos y constitutivos
a) Macro elementos
Fuente de:
Se adiciona como:
La célula lo utiliza para:
Azufre
SO42-, tiosulfato
o sulfuro
Producir aminoácidos (cisteína y
metionina) y diferentes coenzimas
Fósforo
Fosfatos de sódio
o potasio
calcio,
magnesio
y potasio
sodio
sales inorgánicas
Na Cl
Funciona como Buffer
Para producción de ATP,
fosfolipidos y Ac Nucleicos
Co factores de enzimas
Estabiliza la
presión osmótica
1. Elementos energéticos y constitutivos
b) Micro elementos o trazas
Son metales que se requieren en muy pequeñas cantidades. Participan en la estructura de
las enzimas, vitaminas, transportadores de electrones como citocromos. Son
contaminantes de los macroelementos y se incorporan junto a ellos en los medios de
cultivo.
Frecuentemente esenciales:
Cr, Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W, V, Zn
Inhibidores del crecimiento:
Au, Ag, Cd, Cr, Pb, y cualquier microelemento a concentración mayor
que 10-4 M puede resultar tóxico para el desarrollo de los microorganismos.
1. Elementos energéticos y constitutivos
b) Factores de Crecimiento
Son compuestos orgánicos específicos requeridos en muy bajas
concentraciones y que no pueden ser sintetizados por la célula
Si la secuencia de producción enzimática, de un determinado componente.
(Por ej: Histidina) esta interrumpida por alguna alteración, este componente no
podrá sintetizarse por la célula y se convertirá en un factor de crecimiento.
Ejemplos de factores de crecimiento : vitaminas, como las del
complejo B algunos aminoácidos ,purinas y pirimidinas
2. Agua
•El agua representa el 80-90% del peso
total de una célula
•Es fundamental para la realización de
todos los procesos metabólicos
•Funciones enzimáticas, solvatación
de materiales orgánicos e inorgánicos,
y donación de electrones para
organismos fotosintéticos
En los medios de cultivo se usa agua destilada,
libre de iones como Ca2+ y Mg2+
3. Agentes solidificantés
Cuando se agregan a un medio de cultivo permiten aislar
colonias bacterianas. El mas utilizado es el Agar. Su uso es opcional
El agar se enfría
y se solidifica
Permite aislar
Colonias bacterianas
Placa de petri
Se adiciona el
medio de cultivo
con agar fundido
El Agar es un polisacárido ácido derivado de algas marinas, formado
principalmente por galactosa con un grupo sulfato.
Se usa sin problemas en medios de cultivo
porque las bacterias NO lo digieren.
Sus características:
-Funde a 80-100°C y permanece líquido hasta 50-55°C.
- Permanece sólido a 37°C, temperatura de incubación de la mayoría de las
bacterias patógenas del hombre.
-No es tóxico para las bacterias
-Utilizado al 1.5-2%, permite el aislamiento de colonias (poblaciones de
microorganismos derivadas de una única célula), lo que resulta imposible en
medios líquidos!!
- Es transparente, lo que facilita la visualización de las colonias.
Condiciones Físicas de un medio de cultivo
Temperatura
mesófilos: 35-37°C
psicrófilos: 15-20°C
termófilos: 50-60°C
a)
aerobios estrictas: requieren oxígeno para crecer.
b) anaerobios obligados: el O2 les resulta tóxico.
c) anaerobios facultativos: pueden crecer tanto en
condiciones aerobias como en condiciones anaerobias
Presencia
de oxígeno
d) microaerófilos: necesitan bajas tensiones de O2 y una
atm enriquecida en CO2.
e) anaerobios aerotolerantes: crecen en ausencia de O2
y si son expuestos al O2 no mueren.
presión osmótica
luz:
Humedad:
pH:
la mayoría de las bacterias crece en 0.1 a 1% NaCl
es importante para los microorganismos fotosintéticos
Los microorganismos necesitan un ambiente húmedo para su desarrollo
la mayoría de las bacterias crece en medio neutro o levemente alcalino
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Por su origen
químicamente definidos
o sintéticos
Su composición química se
conoce con exactitud, cada
componente es de alta pureza
analítica y realiza un aporte
específico ej: medios para
autotrofos
naturales o complejos
Se preparan a partir de sustancias
naturales de origen animal o vegetal
de composición química no
rigurosamente constante: leche,
suero, macerado de maíz,etc
Ej: medios para quimioheterotrofos
Ej. Medio Definido para fototrofos:
CO2 ……………………….. (fuente de C)
NaNO3 …………………… (fuente de N)
Na2SO4 ……………………. (fuente de S y Na)
KH2PO4 ……………………. (fuente de P y K)
Trazas ……………………… varias
H2O ………………………… (indispensable para
toda función celular)
Conjunto de sales,
Especificas Para un
determinado
tipo de
microorganismo
Ej- agar nutritivo (para bacterias
quimioorganotrofas)
Peptona de carne ………….. 0.5 g
Extracto de carne ………….. 0.3 g
NaCl ………………………… 0.5 g
Agar ……………………… 1.5 – 2 g
Agua destilada ……………. 100 ml
Aditivos que no tienen una
Composición nutritiva definida
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Por su Consistencia
Líquidos
No contienen
solidificante
y no permiten
el aislamiento
de colonias
sólidos
semisólidos o blandos
Incluyen agar en
concentraciones
de 1.5 a 2%
incluye agar
al 0.3%
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Por su Composición
Comunes
incluyen una fórmula
nutritiva básica que
permite el crecimiento
de microorganismos
poco exigentes.
Enriquecidos
Tienen una alta calidad
nutritiva por el agregado
de componentes muy
ricos como leche, sangre,
huevo, líquido, etc. Se
utilizan en el cultivo de
bacterias exigentes
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Por su función:
Medios de
enriquecimiento:
Medios selectivos
son medios líquidos
que favorecen
la multiplicación
de un determinado
microorganismo.
son medios sólidos
que favorecen
la multiplicación
de un determinado
microorganismo.
Medios diferenciales
permiten discriminar entre
diferentes tipos de bacterias
basándose en características
metabólicas particulares
de cada uno.
PARTE B: SIEMBRAS Y REPIQUES
Siembra: se entiende por siembra al acto de transferir o colocar un
microorganismo en un medio de cultivo adecuado. La transferencia se
efectúa desde el hábitat natural (nicho ecológico) al medio de cultivo.
Muestras
Medio de cultivo
Trasplante o repique: es la transferencia de gérmenes desde un
medio de cultivo a otro.
¿Con qué se siembra?
Ansas en anillo
y un ansa recta
Crecimiento de
Colonias bacterianas
Siembra en placa
con medio solido
¿Con qué se siembra?
Micropipeta o
Pipeta pasteur
Espátula de
Drigalski
Siembra
Crecimiento de
Colonias bacterianas
Micropipeta
Pipeta pasteur
Técnica aséptica para siembras y repiques
La "Técnica aséptica" tiene un doble objetivo:
a) evitar que el operador se contamine con microorganismos procedentes
de las muestras o cultivos y
b) evitar la contaminación de las muestras y cultivos con microorganismos
procedentes del ambiente o del propio operador
A- se esteriliza el ansa a la llama
B- se sostiene el ansa con el índice
. Luego con el meñique .
se destapa el tubo de muestra .
C. Se flamea la boca para evitar
Contaminación
D- se sumerge el ansa para tomar
Un inoculo del tubo
E- se flamea el tubo, para
Evitar su contaminación
F- se tapa con el dedo meñique
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