Información general
• Clases teóricas y practicas semanales.
• Cambios de comisión: sólo en las dos primeras semanas de
clases con el correspondiente trámite en despacho de
alumnos (presentar constancia en la cátedra).
• Tendrán 2 exámenes parciales escritos teórico-prácticos.
Promoción:
• Asistir al 80 % de las clases prácticas. DOS FALTAS.
• Aprobar al menos con 7 puntos los 2 exámenes parciales. NO SE
PROMEDIAN LAS NOTAS.
• Tener aprobadas las asignaturas correlativas.
• No se pueden recuperar parciales para promocionar.
Regularización:
• Asistir al 80% de las clases prácticas. DOS FALTAS.
• Aprobar al menos con 4 puntos los 2 exámenes parciales. NO SE
PROMEDAN LAS NOTAS.
• Se puede recuperar un examen parcial por ausencia o aplazo.
PRÁCTICO N° 1
Técnicas para el estudio de microorganismos del suelo
Objetivo: Conocer las técnicas básicas para el análisis
microbiológico del suelo
1)
Normas prácticas para el muestreo de suelo
2)
Técnicas para el cultivo de microorganismos
3)
Técnicas de observación al microscopio
4)
Métodos de aislamiento y conservación
Normas prácticas para el muestreo de suelo
1)
Diseño de muestreo:
•
Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote
•
Forma de muestreo: cultivo, sistema de labranza
•
Profundidad: 0 – 20 cm
2)
Acondicionamiento de las muestras
3)
Preparación de las muestras en laboratorio
Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote
Loma
15 Submuestras = 1 Muestra
Medialoma
Bajo
Agricultura de Precisión
Imagen Satelital
Mapa de Rendimiento Mapa de Ambientes
Elementos de muestreo
Pala
Barreno Manual
Barreno Hidráulico
Forma de muestreo: cultivo y sistema de labranza
Siembra directa
Rastrojo de maíz
Rastrojo de soja
Labranza convencional
Suelo laboreado
Forma de muestreo: profundidad
0 cm.
20 cm.
Acondicionamiento de las submuestras
~200 g.
Preparación de las muestras en laboratorio
Oreado
Mínimo 24 hs.
Tamizado
Embolsado y
Rotulado
Conservación
Visualización de microorganismos: porta objeto enterrado
Suelo en estudio
Riego
Incubación
Portaobjeto enterrado
Actividades
1) Preparación de muestras de suelo en laboratorio:
tamizar, embolsar y rotular.
2) Visualización de microorganismos de suelo:
enterrar un portaobjeto.
Técnicas para el cultivo de microorganismos
Requerimientos para el cultivo de microorganismos en laboratorio:
1)
Condiciones de asepsia: esterilización
2)
Medios de cultivos
3)
Condiciones ambientales
Condiciones de asepsia: esterilización
• Esterilización: eliminar todos los organismos vivos
• Métodos de esterilización:
–
–
–
–
Calor: húmedo y seco
Radiación
Filtración
Productos químicos
Calor húmedo: Autoclave
Combinación de calor, presión y humedad
Para sustancias acuosas
Temperatura de esterilización: 121°C - 20 minutos
A gas con regulación manual
Eléctrica con
regulación automática
Calor seco: Horno de esterilización
Vista exterior
Vista interior
Para materiales estables al calor
(vidrio, metal, porcelana etc.)
Temperatura de esterilización: 160 °C
Tiempo: 2 hs
Otros métodos de esterilización
Radiación UV: superficies,
aire y agua
Filtración: soluciones
lábiles
Productos químicos: mesada,
manos, tapones, etc.
Filtro
•Agua Oxigenada
•Alcohol etílico
•Hipoclorito
•Formol
•Bicloruro de mercurio
Medios de cultivos
• Definición: mezcla balanceada de requerimientos nutritivos para el
crecimiento de microorganismos
• Tipos:
– Generales
– Selectivos
• Composición química: fuente de carbono, fuente de nitrógeno,
fuente de energía, base mineral y factores de crecimiento
• Características: líquidos o sólidos: agentes solidificantes
Composición de medios de cultivos
Medio selectivo: Fijadores de Nitrógeno
FUENTE
Fuente de
Cy
energía
Base
mineral
Agua
COMPUESTO
Medio general
CANTIDAD
FUENTE
COMPUESTO
CANTIDAD
Sucrosa
20 g
Fuente de C
y energía
Almidón
12 g
Fosfato di potásico
0.05 g
Fuente de N
NO3 Na
0.5 g
Fosfato
monopotásico
0.15 g
PO4 HK2
1.0 g
Cloruro de calcio
0.01 g
SO4 Mg 7 H2O
0.5 g
Sulfato de
magnesio
0.2 g
Agente
solidificante
Agar
15 g
Molibdato de sodio
0.002 g
Agua
Agua destilada
1000 ml
Cloruro férrico
0.01 g
Carbonato de
calcio
0.1 g
Agua destilada
1000 ml
pH = 7
Base
mineral
pH = 7
Preparación de medios de cultivo
Pesar componentes sólidos:
encender
registrar la
lectura
colocar recipiente para
pesar
tarar
colocar el componente
a pesar
Disolver con agua destilada: hidratar
componentes sólidos
agregar agua
disolver
Regular pH: pHmetro
soluciones reguladoras
encendido y lavado
protección del electrodo
lectura
lavado del electrodo
Preparación de medio sólido
medio líquido
fundir al calor
agregar agar
medio agarizado
Fraccionar y acondicionar para esterilizar
Fraccionamiento de
medio líquido
Fraccionamiento de
medio sólido
(en caliente)
Acondicionado
para esterilizar
Esterilizar en autoclave
Medios en “Pico de flauta”
Cultivo de microorganismos del suelo en medio líquido
Siembra
Dilución
Incubación
Actividad: colocar una alícuota de suelo en medios general y selectivo.
Tamaño del
lote
Cantidad
de
muestras
Muestreo
de suelo
Profundidad
0-20 cm.
con
rastrojos
Topografía
Composición
n° submuestras
Guardar en
conservadora
Una muestra
Preparación de muestras en laboratorio
Oreado
Tamizado
Envasado y Rotulado
Conservación en heladera
Práctico 1
Esterilización
• Autoclave - horno
• Radiación
• Filtración
• Productos químicos
Laboratorio
Medio de cultivo
Composición química
• Base mineral
• Fuente de carbono
• Fuente de energía
• Agua
Práctico 3
Aislamiento
Observación
Preparación de medios
Líquidos
Sólidos
• Pesar drogas
• Disolver con
agua destilada
• Regular pH
• Fraccionar
• Pesar drogas
• Disolver con agua destilada
• Regular pH
• Agarizar
• Fundir
• Fraccionar
Esterilización en autoclave
* Visita al Laboratorio de
Microbiología Agrícola F.C.A.
Siembra de suelo
Incubación
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Práctico 1