BIOLOGÍA
MOLECULAR
Carolina Pérez Almendro
Hospital U. Doce de Octubre
La Biología Molecular es la ciencia que tiene como objetivo el estudio de los
procesos que se desarrollan en los seres vivos desde un punto de vista
molecular. La biología molecular se encarga principalmente del entendimiento
de las interacciones de los diferentes sistemas de la célula ,entre ellas las del
DNA y el RNA, que son las que vamos a estudiar, ya que el Hospital
Universitario Doce de Octubre, se encargan del estudio de diferentes
mutaciones para el diagnostico de :
-Leucemias
-Enfermedades trombóticas, como la
trombofília
-Cáncer de colon.
Por lo que podemos decir que la Biología Molecular de dicho hospital tiene su
base en la hematología.
PREPARACIÓN DEL DNA Y RNA
Para realizar estás técnicas en primer lugar tenemos que
extraer el DNA o RNA, de las diferentes muestras, como
pueden ser sangre periférica, Medula Ósea, o biopsias de
colón. Dependiendo de la técnica que se necesite se va a usar
DNA o RNA.
-La extracción del DNA es bastante sencilla, ya que se basa en
una máquina que con diferentes reactivos y tampones, los
cuales están a diferente PH, van a extraer el DNA
-La extracción del RNA es bastante compleja, ya que antes de
su extracción hay que hacer un lavado y separar los leucocitos,
a continuación se le van echando diferentes reactivos,
centrifugando hasta su extracción.El RNA se deteriora en muy
poco tiempo hay que hacer una retrotranscripcion y
transformarlo en DNA, y posteriormente realizar una PCR, para
ver de que calidad es el RNA extraído, ya que si es de mala
calidad, se comunica.
SECUENCIACIÓN DEL DNA
La secuenciación de ADN es un conjunto de métodos y técnicas
bioquímicas cuya finalidad es la determinación del orden de los
nucleótidos (A, C, G y T) en un oligonucleótido de ADN.
Secuenciación por fluorescencia
En el Doce de Octubre realizan una secuenciación por
fluorescencia que consiste en lo siguiente en marcan
cada uno de los cuatro didesoxinucleótidos que terminan
la cadena con un colorante fluorescente diferente, con
fluorescencias a diferentes longitudes de onda. Este
método es atractivo por su gran capacidad y rapidez y
actualmente es el método de referencia en la
secuenciación automatizada con analizadores de
secuencia controlados por computadora. Entre sus
limitaciones potenciales están los efectos de los
terminadores fluorescentes en el fragmento de ADN, que
produce alturas y formas de picos desiguales en los
registros de secuencia de ADN del cromatograma tras la
electroforesis capilar. El método de secuenciado por
terminador fluorescente junto con analizadores de
secuencia de ADN de alto rendimiento se utiliza ahora
para la inmensa mayoría de los proyectos de
secuenciación, puesto que es más fácil de llevar a cabo y
tiene un coste menor que los anteriores métodos de
secuenciación, pero la mayor ventaja de este método es
que la secuenciación se puede llevar a cabo en una sola
reacción, en lugar de en cuatro reacciones como en el
método del cebador marcado. En una secuenciación por
terminador fluorescente se
A continuación,
una vez obtenida
la gráfica, se
miraba donde
había una
mutación y
comparando con
unos patrones de
mutaciones, se
llegaba a saber
cual era la
mutación y cual
era el problema
que acarreaba.
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