TECNICAS PARA ANALISIS
DE ACIDOS NUCLEICOS
ELECTROFORESIS
La electroforesis de ácidos
nucleicos en geles de
agarosa, permite separar
fragmentos de DNA de
diferente tamaño.
Sin embargo, no se puede
saber en cuál de los
fragmentos se encuentra el
gen o la secuencia de DNA
que se busca.
HIBRIDACION DE ÁCIDOS
NUCLEICOS
El DNA puede sufrir un proceso reversible de
separación y reasociación de hebras
DNA en estado nativo
Denaturado
Renaturado
Sonda
marcada
Acido nucleico
inmovilizado
Paso 1: Separación de fragmentos
de RNA por electroforesis.
Paso 2: Transferencia del RNA al
filtro o membrana
Paso 3: Hibridación con la sonda específica complementaria
Sonda
marcada
Acido nucleico
inmovilizado
Paso 4: Lavado y detección de la
sonda marcada
La hibridación con sondas específicas
permite determinar la identidad de un
fragmento de DNA o RNA
La hibridación en
condiciones de mayor
estringencia garantiza
una mayor especificidad
en la interacción.
TIPOS DE HIBRIDACION
1. Tipo de interaccion: DNA – DNA / DNA – RNA/ RNA – RNA
2. Hibridación en filtro:
Southern
Northern
Colony Hibridization
Dot-blot
3. Hibridacion en solución : substractiva + columna de
hidroxiapatita
4.
Hibridacion in situ
Colony hibridization
Por hibridación en colonia, se puede
identificar cuáles de las colonias
recombinantes obtenidas, tiene
clonado un fragmento de DNA en
particular.
SECUENCIAMIENTO
• Uso de dideoxinucleótidos (ddNTPs)
• 4 reacciones por separado, en paralelo.
• Separación de fragmentos producidos por
electroforesis en gel de secuenciamiento
• Animación (Lodish)
Se realizan 4 reacciones por separado
Oligonucleótido o Primer
Templado
Figure 7-29a
Descargar

TECNICAS PARA ANALISIS DE ACIDOS NUCLEICOS