Laboratorio # 3
Vilmarie Figueroa Nieves
Victor Torres
Tania N. Pérez Del Río
1
2

Materiales:
◦ Un cultivo de 24 horas
de cualquier bacteria
◦ Azul de metilo
◦ Cristal violeta
◦ Carbol fuchsin
◦
◦
◦
◦
◦
◦
Mechero
“Loop” de inoculación
Bandeja de tinción
Microscopio
Papel de lente
Porta objeto
3
• Visualización de los microorganismos se
dificulta por:
― Tamaño
― Transparencia
― Decoloración
4
• Químicamente la tinción es un compuesto
orgánico:
Cromóforo
Benceno
Compuesto
orgánico sin color
Imparte color al
Benceno
Auxocrómo
Grupo químico que permite
la ionización al grupo
cromógeno
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Técnicas de tinción
Tinción Simple
Morfología: cocos, bacilos y
espirilos.
Arreglo: cadenas, agrupaciones,
pares y tétradas.
Tinción Gram
Grupos: gram+ y gramVisualización: flagelados,
cápsulados, esporas y
núcleos.
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• Fijación de las bacterias
Coloque una o dos gotas de el agua en el
centro de la laminilla.
7
• Fijación de las bacterias
Con un movimiento circular, riega la suspensión en la
laminilla aproximadamente del tamaño de 10¢.
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• Fijación de las bacterias
Transfiere una pequeña cantidad del inóculo bacterial
del cultivo a la gota de agua. Riega el mismo de forma
circular aproximadamente del tamaño de 5¢.
9
• Fijación de las bacterias
Dejar que se seque el frotis. Aguantando la laminilla por un
extremó, rápidamente pásala por el mechero de dos a tres veces.
10

Procedimiento:
◦ Preparar el frotis de la bacteria.
◦ Poner una laminilla en la bandeja de tinción e
inundar el frotis con los indicadores de
tinción.
11
• Se utiliza un sólo reactivo colorante:
― Carbón fuchsin: 15 a 30 segundos
― Cristal Violeta: 20 a 60 segundos
― Metíl Azul: 1 a 2 minutos
Echerichia coli
Bacillus cereus
Staphylococcus aureus
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• Resultados
Metil Azul
Cristal Violeta
Carbón Fuchsin
Dibujo
Organismo
Morfología celular:
-Forma
-Arreglo
Color
____________
____________
____________
____________
____________
____________
____________
____________
____________
____________
____________
____________
13
• Resultados
Esférico
Cilíndrico
Espiral
Helicoidal
14
15

La mas importante tinción utilizada en
bacteriología es la tinción Gram, nombrado por
el Dr. Christian Gram. Este divide las células
bacterianas en dos grandes grupos, Gram
positivo (+) y Gram negativo (–), el cual es un
gran instrumento para la clasificación y
diferenciación de los microorganismos.
16

Objetivos:
◦ Demostrar las bases químicas y teóricas para
diferencial el procedimiento de tinciones.
◦ Demostrar las bases químicas de una tinción.
◦ Diferenciar entre dos principales grupos de bacterias:
Gram + y Gram -
17
Principios:
Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas:
Gram Positivas
Gram Negativas
18
Principios:
Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas:
19
Principios:
• Peptidoglucano:
•
Copolímero formado por
secuencias de:
•
N-acetil-glucosamina
•
Acido Nacetilmurámico
•
Por enlaces β-1,4
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Principios:
Bacterias Gram Positivas
Bacillus anthracis
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Observaciones
Bacterias Gram Negativas
Escherichia coli
22
1
• Se utiliza un sólo reactivo colorante:
2
1) Cristal Violeta: 1 minuto
2) Iodo: 1 minuto
3
3) Alcohol: 10 a 15 segundos
4) Safranina: 45 segundos
7
6
5
4
23
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• Resultados
E. Coli
B. Cereus
S. aureus
____________
____________
____________
____________
____________
____________
____________
____________
____________
____________
____________
____________
Dibujo
Organismo
Morfología celular:
-Forma
-Arreglo
Color
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Observaciones
Bacterias Gram Negativas
Proteus vulgaris
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GRAM -
27
Observaciones
Bacterias Gram Positivas
28
GRAM +
29
Spirillum
30
Spirillum
31
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Laboratorio # 3 Tinción Gram, simple, negativa,