Integración de DNA en
microorganismos:
herramientas genéticas I
Integración de DNA exogeno en el genoma
bacteriano
• Recombinación homóloga
• Recombinación sitio-específica
• Recombinación ilegítima
– Transposición
Recombinación homóloga
Homologous pairing
Resolution
One-strand repair/replication
Recombinación homóloga: respuesta a DSB
5’
3’
3’
5’
3’
RecBCD
5’
3’
5’
Recombinación homóloga: RecBCD y Chi
3’
RecBCD
5’
Chi sites:
E. coli 5’GCTGGTGG3’
B. subtilis 5’ACTGCG3’
L. lactis 5’GCGCGTG3’
3’
5’
RecBCD
RecA
3’
5’
Recombinación homóloga: desplazamiento de hebra
RecA
RecA
3’
5’
Intermediario de Holliday
A
RuvABC
B
B
A
RuvAB
RuvC
RuvC
Integrando DNA por recombinación
homóloga
Integración tipo Campbell
Conversión génica
Intercambio alélico
marker
marker
Resolución de secuencias en tandem
marker
marker
marker
Chi mejora el intercambio alélico
marker
3’
RecBCD
5’
RecBCD
3’
5’
Genes marcadores de selección positiva y negativa
sacBR (B.subtilis)
nar1
Production of levansucrasa in
presence of 5% sacarosa es tóxica en
Gram -
Necesario para asimilar nitrato,
tóxico en presencia de clorato
Conversión génica
Ab
Ab
Ab
Conversión génica y Chi, haciendo más facil
el trabajo
Ab
Conversión génica: para KOs y mas...
Ab
Ab
X
X
Ab
Ab
X
X
Ab
X
X
Ab
Integración de DNA exogeno en el genoma
bacteriano
• Recombinación homóloga
• Recombinación sitio-específica
• Recombinación ilegítima
– Transposición
Recombinación específica de sitio
Estructura de una diana de SSR
SSR en acción
SSR en acción
SSR en acción
SSR en acción
Invertasas
Sistemas de variación de fase
Resolvasas/Integrasas
Estabilidad plasmidica, transposición...
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Recombinación homóloga