 El SIDA o Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida
es una enfermedad causada por el virus de la
inmunodeficiencia humana (VIH). Este virus destruye
o daña las células del sistema inmune de la persona
interfiriendo en la capacidad del cuerpo de luchar
efectivamente contra los virus, bacterias y hongos que
causa la enfermedad. La infección por VIH hace que la
persona sea más susceptible a infecciones que
normalmente el cuerpo humano puede resistir como la
neumonía, la meningitis y cierto tipo de cáncer.
 Normalmente, los glóbulos blancos y anticuerpos atacan y
destruyen a cualquier organismo extraño que entra al
cuerpo humano, esta respuesta es coordinada por
linfocitos CD4. Desafortunadamente, el VIH ataca
específicamente a los linfocitos CD4.
Una vez adentro, el virus les inyecta su propio material
genético y los utiliza para replicarse o hacer copias de sí
mismo.
Cuando las nuevas copias del virus salen de las células a la
sangre, buscan a otras células para atacar. Mientras, las
células de donde salieron mueren.
El virus gana. El número de células CD4 disminuye
progresivamente y la persona sufre de inmunodeficiencia,
lo cual significa que la persona no puede defenderse de
otros virus y bacterias que causan enfermedades.
 Enzimoinmunoensayo para la detección in vitro
especifica de anticuerpos contra el virus VIH-1 Y VIH-2
en suero o plasma.
 Se utiliza como complemento en pacientes con
repetidas pruebas positivas de ELISA
 Métodos muy sensibles: falsos positivos
 Western Blot: muy específico
 La prueba utiliza tiras de nitrocelulosa a
las cuales se les agrega mediante
electroforesis proteínas antigénicas que
se obtienen de VIH-1 inactivado mas un
péptido sintético específico del VIH-2.
 Las tiras se incuban individualmente con el suero o
plasma diluido del paciente y un control.
 En caso de existir anticuerpos para VIH, estos se
uniran a las proteinas del VIH-1 y el peptido del VIH-2.
 Se lavan las tiras para eliminar productos no ligados.
 Para visualizar la existencia de complejos antigenoanticuerpo se utiliza un anticuerpo de cabra anti IgG
conjugado con fosfatasa alcalina y sustrato BCIP/NBT.
 Añada 2 ml de Tampón de
lavado diluido a cada pocillo.
 Coloque cada tira en su pocillo con el número hacia
arriba (incluir tiras para los tres controles).
 Incubar durante 2 minutos a temperatura ambiente en
un plato basculante (12-16 ciclos/min). Extraiga el
tampón por aspiración.
 Añada 2 ml de Tampón Blotting de trabajo a cada




pocillo.
Añada 20 microlitros de suero del paciente o de
control en cada uno de los pocillos.
Cubra la bandeja e incube 1 hora a temperatura
ambiente en la plataforma basculante.
Incline la bandeja para aspirar la mezcla de los
pocillos.
Lave tres veces cada tira con 2 ml de Tampón de
trabajo diluido dejando que se empapen durante 5 min
en la plataforma durante los lavados.
 Añadir 2 ml de solución del conjugado de trabajo a




cada pocillo.
Cubra e incube durante 1 hora a temperatura
ambiente.
Aspire los conjugados de los pocillos.
Repetir el lavado anterior.
Añada 2 ml de solución sustrato a cada pocillo. Cubra e
incube durante 15 min.
 Aspire el sustrato y aclare las tiras 3 veces con agua de
calidad reactivo para detener la reacción.
 Dejar secar las tiras dentro de los pocillos o en toallas
de papel.
 Coloque las tiras en una hoja de trabajo, observe las
bandas y califique los resultados.
Peso molecular
Gen
Antígeno
Descripción
gp 160
ENV
Forma polimérica
de la gp 41
Ancha y difusa de
glucoproteína
gp 120
ENV
Membrana externa Difusa de
glucoproteína
P 66
POL
Transcriptasa
inversa
Banda discreta
P 55
GAG
Proteína
precursora
Banda discreta
P 51
POL
Transcriptasa
inversa
Banda discreta
justo por debajo de
p 55
P 39
GAG
Fragmento de p 55
Banda discreta
gp 41
ENV
Transmembrana
Difusa de
glucoproteína
P 31
POL
endonucleasa
Doblete
P 24
GAG
Proteína central
Banda ancha
P 17
GAG
Proteína central
Banda ancha
 POL: transcriptasa reversa
 GAG: proteina basica viral
 ENV: precursor viral de membrana externa
 Gp 120: ENV, se une a los CD4
 La presencia o ausencia de anticuerpos frente al VIH se
determina comparando cada tira con las tiras de
control del ensayo.
 Es improbable detectar el gp 41 sin la presencia de gp
160 ya que este es la forma polimerica del primero. Asi
mismo la banda de gp 41 es una banda difusa por lo
que si se encuentra una banda nítida no debe
interpretarse como gp 41.
 La banda p 55 sueles detectarse cuando hay una
reactividad fuerte para p 24 y p17 (GAGs)
 Las bandas POL p66, p51 y p31 se detectan
simultaneamente; p51 es menos sensible que las otras.
 La reactividad cruzada para el VIH-2 es variable, es
tipica la reactividad con antigenos GAG y/o POL. En
algunos casos tambien con gp 160, es rara con gp 41.
 Que la banda de control de suero sea visible, con un
control negativo los resultados son no validos.
 Identificacion del peso molecular de cada banda de la
tira utilizando como guia las las tiras de control.
 Según la OMS se considera positivo el Western Blot si
se detectan 2 bandas de ENV con o sin GAG o POL
PATRON
INTERPRETACION
Ninguna banda virica
especifica presente
NEGATIVO
Anticuerpos p 17
UNICAMENTE, sin ninguna
otra banda
NEGATIVO
Detección de 2 ENV y GAG o
POL
VIH-1 +
Detección de 2 ENV y GAG o
POL y banda especifica de
VIH-2 visible
VIH-1 + con VIH-2
SEÑALADO
Cualquier banda virica
especifica presente, pero el
patron no cumple criterios
para positivo
DUDOSO
 1. Control positivo
 2.Control negativo
 A. Paciente
negativo
 B. Paciente
negativo con
presencia
anticuerpos no
especificos.
 C. Paciente
positivo.
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HIV BLOT 2.2 DE MP DIAGNOSTICS