UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOANALISIS
ESCUELA DE BIOANÁLISIS
Colinesterasa Plasmática en el Ganado Vacuno
de la Zona Sur del Lago de Maracaibo
MSc. José Rafael Luna
Junio de 2005
Con los fines de producir, incrementar y
preservar la producción Láctea y Cárnica


Se ha luchado contra las distintas
plagas que amenazan la ganadería y
los productos agrícolas que la
sostienen
Y se combaten los insectos y otros
animales, vectores de enfermedades
transmisibles.
Ectoparásitos

Garrapata
Boophilus microplus
Este ixódido transmite enfermedades
hemotrópicas del bovino:
-Babesiosis (fiebre tic)
-Anaplasmosis
BOOPHILUS - Adult Male
BOOPHILUS - Adult Female
Babesiosis
Anaplasmosis
Anaplasma marginale
Consecuencias
1. Retardo del crecimiento
2. Trastornos de desarrollo y conformación
3. Disminución de la producción de leche
4. Reducción de las ganancias de peso que conlleva
a la disminución de la producción de carne
5. Desmejoramiento de la calidad de los animales,
lo cual disminuye el valor comercial de los
mismos
6. Abortos y esterilidad que frenan el aumento
natural de los rebaños
7. Finalmente la muerte.
Perdidas económicas

Brasil: 1000 millones de $ anuales

Australia: 100-150 millones de $ anuales

Cuba: 100.000 cabezas en la última década

Venezuela: la población bovina actual se estima en
un promedio 12 millones de cabezas con una
prevalencia del 85% del B. microplus (Power y Silvestri, 1984)
controles sanitarios
Erradicación de la B. microplus mediante el
uso de acaricidas:
1. Fosforados
2. Carbamatos
3. Diamidinas
4. Piretroides sintéticos
Organofosforados y Carbamatos
1. Actúan
inhibiendo
la
transmisión
neuromuscular del artrópodo afectando la
enzima acetil colinesterasa.
2. Son medianamente tóxicos para el huésped
y la persistencia varía acorde a la molécula
utilizada.
3. Se utilizan tanto como mosquicidas y
acaricidas.
Métodos de aplicación
 Aspersión
 Inmersión
 Derrame
dorsal (pour-on)
Desarrollo de resistencia




Cambios del comportamiento
Disminución de la permeabilidad de la
cutícula, resultando una menor penetración
del acaricida a la hemocele
Aumento de la biotransformación del tóxico
(resistencia metabólica)
Disminución de la sensibilidad en el sitio de
acción del tóxico
Factor de resistencia (FR)
Región
Plaguicida
FR
Mérida
Coumafos
6.80
Trujillo
Coumafos
32.26
Lara
Coumafos
39.52
Zulia
Coumafos
36.36
Coronado A, 1997
Acciones negativas en los
controles sanitarios
Debido a que los productos
agrícolas son más baratos que los
acaricidas algunos ganaderos los
utilizan para el control de la
garrapata


La toxicidad del producto
Forma de aplicación de estos
compuestos


Diluciones incorrectas
Bajo volumen de solución acaricida por
animal

Bombas con presión muy alta o deficiente

Boquillas inapropiadas
Resistencia
Intoxicación del Animal
MECANISMO DE ACCIÓN
FISIOPATOLÓGICO
ESTRUCTURA DE UNA NEURONA Y SINAPSIS NEURONAL
HIDRÓLISIS FISIOLÓGICA DE LA
ACETILCOLINA
AChE
OH
COLINA
O
CH3
(CH3)2-N-CH2-CH2-OH
+
CH3-COOH
H3C-N-CH2-CH2-O-C-O
CH3
H3C-N-CH2-CH2-O-C=O
CH3
ÁCIDO ACÉTICO
CH3
COMPLEJO
ENZIMA-ACETILCOLINA
O
C=O
ACETILCOLINA
ENZIMA
ACETILADA
Fuente: Jeyaratnam J., Maroni M. Toxicology, 91(1994):17
CH3
OH
RO
Características generales
de los organofosforados
O
RO
P
RO
S
P
X
RO
X
OXONES TIONES
Son ésteres del ácido fosfórico
Generalmente son liposolubles
FACILITA LA PENETRACIÓN
EN EL ORGANISMO
MECANISMOS DE ACCIÓN DE
ORGANOFOSFORADOS
INTOXICACIÓN AGUDA:
SÍNDROMES COLINÉRGICOS
LA INHIBICIÓN DE LAS COLINESTERASAS, CON LA
CONSIGUIENTE ACUMULACIÓN DE ACETILCOLINA
ES EL MECANISMO FUNDAMENTAL PERO NO EL
ÚNICO.
MECANISMOS DE ACCIÓN DE ORGANOFOSFORADOS
INTOXICACIÓN AGUDA:
SÍNDROMES COLINÉRGICOS
LA ACCIÓN LA EJERCEN SOBRE:
Colinesterasa verdadera (presente
en S.N.C., placa neuromuscular,
ganglios autónomos y glóbulos rojos)
Butirilcolinesterasa o pseudocolinesterasa (presente en S.N.C.,
páncreas, hígado, plasma)
ALGUNOS PLAGUICIDAS
ORGANOFOSFORADOS
NOMBRE COMÚN (ISO-1)
NOMBRE COMERCIAL
PHORATE
THIMET
DISULFOTÓN
DISYSTON
DEMETÓN-S-METHYL
SYSTOX
TERBUPHOS
COUNTER
PARATHION-METHYL
METILPARATIÓN
FOLIDOL
ALGUNOS PLAGUICIDAS
CARBAMATOS
NOMBRE COMÚN (ISO-1)
ALDICARB
NOMBRE COMERCIAL
TEMIK
ALDICARB
PROPOXUR
BAYGÓN
UNDEN
BENOMYL
BENLATE
CUADRO CLÍNICO DE LA INTOXICACIÓN AGUDA
(ORGANOFOSFORADOS Y CARBAMATOS)
TRIPLE CUADRO CLÍNICO DE BASE
COLINÉRGICA
SÍNDROME MUSCARÍNICO
SÍNDROME NICOTÍNICO
SÍNDROME NEUROLÓGICO
CENTRAL
Síntomas Muscarínicos
1. Salivación abundante
2. Diarrea
3. Lagrimeo
4. Disnea
5. Tos frecuente
6. Miosis
Síntomas Nicotínicos
1. Contracciones de los músculos de
los parpados, lengua y musculatura
en general
2. Tetania generalizada
3. Debilidad y parálisis de los músculos
esqueléticos
Síntomas del SNC
1. Inicialmente
se
presenta
una
estimulación seguido de una Depresión
del SNC
2. Ataxia
DIAGNÓSTICO DE INTOXICACIÓN
POR ORGANOFOSFORADOS Y
CARBAMATOS
ANTECEDENTES DE EXPOSICIÓN
CUADRO CLÍNICO
PRUEBAS DE LABORATORIO
DIAGNÓSTICO DE INTOXICACIÓN
POR ORGANOFOSFORADOS Y
CARBAMATOS
PRUEBAS DE LABORATORIO
Descenso de la actividad de la
Acetilcolinesterasa eritrocitaria
Descenso de la actividad de la
Pseudocolinesterasa plasmática
METODO POTENCIOMETRICO DE MICHEL
En el método potenciométrico de Michel para
eritrocitos y plasma, la cantidad de ácido es medida
en términos de cambio de pH producido por
la actividad enzimática en una solución tampón
estándar en un período de tiempo definido.
ΔpH/hora
METODO DE ELLMAN
En este método la actividad de la acetilcolinesterasa es
medida por el color amarillo producido por la
tiocolina cuando reacciona con ditiobisnitrobenzoico
(DTNB) a una absorbancia de 412 nm.
Actualmente fundamenta los equipos para determinar
colinesterasa de muchas casas comerciales tales
como la Boheringer, Wiener, etc.
Valores promedios de la enzima colinesterasa en 276
bovinos hembras del Estado Carabobo
CE (μM.mL-1)
Novillas Edad:
16 a 20 meses
Holstein Puro
Edad: 3 a 7 años
Adultas
Holstein Puro
Adultas Edad: 3 a
7 años Mestizo
P. Suizo
1,26+ 0,22
1,14+ 0,28
1,14+ 0,28
Valores promedios de la enzima colinesterasa en 357
bovinos hembras del Estado Guárico
Parámetros
(Unidades)
Cebú Puro
Mestizo
Holstein
Mestizo
Mestizo
Pardo Suizo Cebú
(n = 40)
(n = 40)
(n = 98)
(n = 179)
1,24+ 0,15
1,32+ 0,14
1,23+ 0,19
CE (µM.mL-1) 1,25+ 0,15
Colinesterasa eritrocítica (CE) se determinó según el método fotométrico de FLEISHER y POPE, modificado por
PETTY y LOWELL, mediante un fotocolorímetro Klett-Summerson, expresando la actividad en micromoles de
acetilcolina hidrolizada por mililitro de sangre total
PROBLEMA
CUALES VALORES DE REFERENCIA DE LA
COLINESTERASA SE UTILIZARÍAN EN
CASO
DE
INTOXICACIÓN
POR
INHIBIDORES DE LA MISMA
OBJETIVO GENERAL
Determinar los valores de referencia de
la actividad de la colinesterasa
plasmática en muestras provenientes de
ganado vacuno.
DISEÑO EXPERIMENTAL
INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS
1. Plaguicidas utilizados con fines pecuarios y agrícolas
2. Características del animal
3. Estado de salud
4. otros
Características de la población
estudiada
133 ANIMALES ZONA SUR DEL LAGO
1. Hembras de producción lechera
2. De 4 a 6 años de edad, con peso de 380 a 450 Kg
3. De raza mestiza Pardo-Hosltein y Pardo-Cebú
Las fincas además de dedicarse a la producción
lechera presentan ganadería equina y poseen
actividad agrícola:
• 2,4-D amina 6 libras ( ácido 2,4-Difenoxiacético 70%)
• Combo ( Picloran 24% + Metsulfuran 60%)
• Gramoxone N.F (Paraquat 18.50%)
• Garafos (Malathion 99%)
PUNCIÓN VENA YUGULAR CON AGUJA N° 18
SE APLICO EL MÉTODO DE ELLMAN MODIFICADO
(CASA COMERCIAL WIENER)
Pruebas de normalidad Kolmogorov-Sminov
P = 0.200
n.s = 0.05
Este resultado permite demostrar que no
se tiene evidencia suficiente para rechazar
que los datos obtenidos no se ajusten a
una distribución normal.
3
2
1
0
-1
-2
-3
200,00
300,00
400,00
500,00
Colinesterasa (U/l)
Gráfico Q-Q Normal para todas las observaciones
poblacionales.
,4
,3
,2
,1
-,0
-,1
-,2
-,3
200
300
400
500
Colinesterasa (U/l)
Gráfico Q-Q Normal sin tendencia para todas las
observaciones poblacionales.
PARA HALLAR EL INTERVALO DE REFERENCIA SE APLICO
EL MÉTODO DEL FACTOR K
(L = x – ks) < p < (U= x + ks)
El intervalo tendrá la siguiente
forma:
1- = 0,95
k = ± 1,96
VALORES ENCONTRADOS
L = 365,57 – 1,96*53,01 = 251,77
U = 365,57 + 1,96*53,01 = 459,57
251,77 < VR
(U.L-1)
< 459,57
Valores de colinesterasa obtenidos de
animales ubicados en la zona.
Muestra de animales
aparentemente sanos
Animal 1
Colinesterasa (U/L)
Animal 2
431.41
Animal 3
340.65
Animal 4
401.20
Muestra de Animal intoxicado
(Garafos)
158.97
( 251.77 – 459.57 U/L)
378.49
CONCLUSIONES
Que los valores de referencia de la
colinesterasa obtenidos por el método de
Ellman modificado (Wiener) estuvieron
entre 251.77 y 459.57 U.L-1
Se puede decir finalmente que el intervalo de
referencia de la enzima colinesterasa obtenido de
la muestra poblacional evaluada puede ser útil
para el diagnóstico de intoxicación por
plaguicidas inhibidores de la colinesterasa
RECOMENDACIONES
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Colinesterasa en Ganado Vacuno