PRÁCTICO N° 5
Interacciones microorganismos - planta
Objetivo: Conocer las técnicas de laboratorio para el
manejo de microorganismos que interactúan con las plantas
Interacciones más comunes
Positivas (sinérgicas)
Negativas (antagónicas)
• Simbiosis (micorrizas, rizobios)
• Mutualismo (Azozpirillum)
• Competencia
• Amensalismo
Técnicas de laboratorio
Aislamiento de microorganismos
Selección de cepas
Producción de inoculantes
Simbiosis: micorrizas
Ectomicorrizas
Intercelulares
Manto externo
Raíz modificada
Hongos superiores
Cultivables
Endomicorrizas
Intercelulares e intracelulares
Sin manto externo
Sin raíz modificada
Hongos inferiores
No cultivables
Aislamiento de microorganismos: rizobios
nódulos
seleccionar
nódulos turgentes
lavar
cortar la raíz
extraer los
nódulos
1 ml de
H2O estéril
macerar
enjuagar con H2O estéril
incubar
desinfectar con
H2O2 (5minutos)
colorear (Gram -)
estriar en
medio YEM
incubar
repicar
(pico de flauta)
conservar
Aislamiento de microorganismos: rizobios
Raíz de leguminosa
Enjuagar con H2O estéril
Extraer los nódulos
Desinfectar con H2O2 (20%)
5 minutos
Aislamiento de microorganismos (rizobios)
Colocar los nódulos en un
tubo con 1ml de agua estéril
Macerar con varilla de
vidrio
Incubar (28-30° C)
Estriar en medio YEM
Extraer una alícuota
Aislamiento de microorganismos (rizobios)
Cultivo de rizobio
Colorear y observar
Incubar y
conservar
Repicar a “pico de flauta”
Síntesis de aislamiento de rizobios
nódulos
seleccionar
nódulos turgentes
lavar
cortar la raíz
extraer los
nódulos
1 ml de
H2O estéril
macerar
enjuagar con H2O estéril
incubar
desinfectar con
H2O2 (5minutos)
colorear (Gram -)
estriar en
medio YEM
incubar
repicar
(pico de flauta)
conservar
Aislamiento de microorganismos: Azospirillum
1 g de raíz
cortar raíz
lavar
incubar
sembrar en medio
NFB semisólido
colocar en H2O
estéril y agitar
extraer alícuota
crecimiento de Azospirillum
incubar
colorear (Gram -)
aislamiento en
medio NFB sólido
incubar
repicar
(pico de flauta)
conservar
Aislamiento de microorganismos: Azospirillum
Gramínea
Extraer alícuota
Cortar raíces
Suspender en H2O
estéril
Agitar
Aislamiento de microorganismos: Azospirillum
Incubar
Sembrar en medio NFB
semisólido
Halo de crecimiento de
Azospirillum
Repicar a “pico de flauta"
Incubar y conservar
Síntesis de aislamiento de Azozpirillum
1 g de raíz
cortar raíz
lavar
incubar
sembrar en medio
NFB semisólido
colocar en H2O
estéril y agitar
extraer alícuota
crecimiento de Azospirillum
incubar
colorear (Gram -)
aislamiento en
medio NFB sólido
incubar
repicar
(pico de flauta)
conservar
Selección de cepas para capacidad fijadora de N
Ensayo de laboratorio: alfalfa
Medio de cultivo: Yensen
Testigo: medio sin N sin inocular
Control: medio sin N inoculado con cepa
eficiente
Tratamientos: medio sin N inoculados con
cepas a testear
Testigo: medio con N sin inocular
Síntesis de selección de cepas
Testigo
medio sin N
sin inocular
Control
medio sin N
inoculado con
cepa eficiente
Tratamientos
medio sin N
inoculados con
cepas a testear
Testigo
medio con N
sin inocular
Selección de cepas: parámetros de evaluación
•
•
•
•
•
•
Cantidad de nódulos
Color
Posición en la raíz
Actividad Nasa
N en planta
Peso de raíz
Síntesis de producción de inoculante
Primera etapa
cultivo de iniciación
(pie de cuba)
incubar (4-5 días)
50 ml
extraer una
alícuota de cultivo
conservado
cultivar en medio
YEM liquido
(pie de cuba)
manguera
colorear
(control del pie de cuba)
filtro de aire
• agregar antibiótico
Segunda etapa
cultivo a gran escala
(biodigestor)
• colocar el pie de cuba
aireador
cámara de aire 30%
Medio Ashby
(estéril)
incubar
3 o 4 días
colorear
(control del inoculante)
Producción de inoculantes
Mangueras
Tapones
Biodigestores
Filtro de aire
Mechero
Aireador
Producción de inoculantes
Planta Industrial
Actividades
1.
Micorrizas: observar raíces de pino
2.
Rizobios: observar bacteroides y bacterias
3.
Producción de inoculantes: observar un biodigestor
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