UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CINÉTICA DE CRECIMIENTO DE
Saccharomyces cerevisiae
Microbiología de alimentos
Dr. Iván Salmerón
I.Q. Edmundo Juárez Enríquez 213548
Q.B.P. Carolina Nájera Domínguez 207445
I.Q. Ana Herrera Ponce 207531
23/03/2011
INTRODUCCIÓN
Saccharomyces cerevisiae
Clase: Hemiascomycetes
Orden Saccharomycetales
Familia: Sacchacromycetaceae
Biomasa
Tamaño: 5-10 micras
Reproducción: gemación
Etanol
Introducción
En el transcurso de la fermentación hay 4 fases de crecimiento:
• 1) lag o de adaptación
• 2) exponencial o log
• 3) estacionaria
• 4) mortalidad
Introducción
C6H1206 —» 2 CH3CH2OH + 2 CO2
OBJETIVO
Monitorear el crecimiento de Saccharomyses cerevisiae, con el fin de
medir el cambio de diferentes parámetros, como pH, consumo de
azúcar, acidez y unidades formadoras de colonias, así como la
duración de cada etapa del crecimiento
MATERIALES
Y
MÉTODOS
• Microbiología III
• Alimentos I
Preparación del Caldo de Crecimiento
•
•
•
•
Glucosa 5 g/L
Extracto de Malta 5%
Solución M9
Inóculo 1%
Inoculado el 15
de Marzo
Acidez y pH
• Muestra directa en
potenciómetro Hanna
Instruments Hi225
• Acidez: valoración de la
muestra con NaOH 0.1 N
• % de ácido acético
Cuantificación de consumo de sustrato
1.4000
1 mL muestra o
estándar
0.6 mL Fenol 5%
3.6 mL H2S
R2 = 0.9822
1.0000
D.O. (492 nm)
• Dubois y col. (1956)
y = 0.0115x + 0.009
1.2000
0.8000
0.6000
0.4000
0.2000
0.0000
0
20
40
60
Glucosa (μg/mL)
‫ ג‬492 nm
80
100
• Al momento de realizar la cinética de
crecimiento, se separó 1 mL de la
muestra
• Se centrifugó a 1500 rpm por 5 min
• El sobrenadante se guardó en
refrigeración para su análisis al día
siguiente
D.O.
• Determinar la D.O. a 600 nm (Durango, 2007)
• Espectrofotómetro PerkinElmer Lambda 25
UFC
• Milles y Misra “ Método de la Gota”
1 mL
1 mL
10-1
10-2
10-3
10-4
PDA X 2
37° C
12 horas
Cinética de Crecimiento Microlector
• Blanco: caldo de crecimiento
• Cinética: caldo de crecimiento inoculado con Saccharomyces
cerevisiae
25 °C
24 horas
D.O. 595 nm
BioTek
Gen 5
Monitoreo de la Cinética Manual
RESULTADOS
Frotis
pH y Acidez
8
7.88 7.86
7.8
y = 0.0002x2 - 0.034x + 7.9161
7.75
% Ácido Acético
pH
0.35
0.30
7.4
0.20
7.2
0.15
7.652
3
y = -2E-05x + 0.0009x - 0.004x + 0.0978
7.6
0.25
R2 = 0.9855
7.82
7.55
2
R = 0.9983
7.15
7
0.10
0
2
4
6
8
10 12 14 16 18 20 22 24 26
0.05
Tiempo (h)
0.00
0
2
4
6
8
10
12
14
Tiempo (h)
16
18
20
22
24
26
Densidad Óptica
0.8
y = -0.0003x2 + 0.0363x - 0.0272
2
y = 0.022x - 0.1423x + 0.3181
R2 = 1
0.7
R2 = 0.997
0.8
D.O. (600 nm)
0.6
D.O. (600 nm)
0.9
0.5
0.4
0.3
0.7
0.6
0.5
0.2
0.4
0.1
0
0.3
0
2
4
6
8
10
41
12
42 14
Tiempo (h)
16
43
18
44 20
22
45
24
46 26
Tiempo (h)
47
48
49
50
Consumo de sustrato
1.4000
y = 0.0115x + 0.009
R2 = 0.9822
1.2000
0.8000
70
0.6000
y = -0.3673x
+ 38.004+ 45.159
y = -0.9944x
2
R = 0.0681
R2 = 0.3165
50
60
Glucosa [µg/mL]
Glucosa [µg/ml)]
D.O. (492 nm)
1.0000
0.4000 40
50
40 30
0.2000
30
20
0.0000
20
10010
0 0
0 40 2
20
40
60
80
100
Glucosa (μg/mL)
444
6
48
852
1056 12 6014
Tiempo
Tiempo
(h) (h)
16
64
18
68
2072 22 76 24
26
UFC
Cuadro 1. Resultados del conteo de UFC por el “método de la gota”, agar PDA, incubación a 37ºC.
El conteo se realizó a las 29 horas después de la toma de la primera muestra.
Caja
Monitoreo
Directo
1:10
1:100
1.1000
1:10000
1.100000
Blanco
-
-
-
-
-
-
-





X




X
X





X

















X





X





X





X


















1.1
0
1.2
2.1
1
2.2
3.1
2
3.2
4.1
3
4.2
5.1
4
5.2
6.1
6.2
5
GRACIAS!!
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CINÉTICA DE CRECIMIENTO DE SACCHAROMYCES