Cromatografía
1
Fase estacionaria
Fase móvil
º
2
1
º
º
2
Clasificaciones de cromatografía
• Según el tipo de fase móvil y de fase
estacionaria
• Según el formato y la geometría de la fase
estacionaria
• Según el tipo de interacción entre la fase
estacionaria y los solutos
• Según el tipo de flujo empleado
• Según el tipo de modificaciones en la fase móvil
• Según el método de detección
• Según la finalidad del experimento
3
Según el tipo de fase móvil y de
fase estacionaria
Fase estacionaria
Sólido
Líquido adsorbido
Fase móvil
Líquido
Gas
Líquido
Gas
4
Según el formato y la geometría de
la fase estacionaria
Fase estacionaria
Formato
Por ejemplo:
Placa fina
Sílice
Columna
HPLC-NP
5
Según el tipo de interacción entre
la fase estacionaria y los solutos
Interacción
Cromatografía
Carga – carga
Intercambio iónico
Dipolos
Hidrofóbica
Diversa pero
específica
Enlaces covalentes
Fase Normal
Fase Reversa
Efecto hidrofóbico
Afinidad
IMAC
6
Según el tipo de flujo empleado
Flujo por
Cromatografía
Gravedad
En columna
Capilaridad
En papel
Capa fina
HPLC
Gases
Fluido a presión
7
Según el tipo de modificaciones en
la fase móvil
Gradiente de:
Polaridad
Concentración
pH
Temperatura
8
Según el método de detección
Detección por
Espectroscopías
diversas
Propiedades físicas
Reactividad
A tiempo fijo
A distancia fija
IR, UV-Vis,
Fluorescencia, MS
Índice de refracción
Conductividad
Ionización
Revelado y
derivatización
Rf
Tiempo de retención
Volumen de elución
9
Según la finalidad del experimento
Separación y
purificación
Separación,
cuantificación y
caracterización
Preparativa
Analítica
10
La pregunta más importante…
¿En qué son distintas las sustancias que
deseo separar?
Ejemplos con proteínas:
11
1.- Carga eléctrica
Cromatografía de intercambio iónico
Fase estacionaria:
Resina con grupos funcionales iónicos
(ej. R-NH3+, RNR3+, R-COO-, R-SO3-)
Fase móvil:
Solución acuosa
Parámetros a modificar:
Fuerza iónica, pH
12
2.- Hidrofobicidad superficial
Cromatografía de efecto hidrofóbico
Fase estacionaria:
Resina con grupos funcionales hidrofóbicos
(ej. R-Ф)
Fase móvil:
Solución acuosa con (NH4)2SO4
Parámetros a modificar:
Concentración de (NH4)2SO4
13
3.- Afinidad por iones metálicos
Cromatografía de afinidad por iones metálicos
inmovilizados (IMAC)
Fase estacionaria:
Resina con grupos funcionales quelantes de metales
(ej:
Fase móvil:
Solución acuosa
Parámetros a modificar:
Concentración de ligandos para iones
metálicos, ej: imidazol
14
4.- Afinidad por ligandos específicos
Cromatografía de afinidad
Fase estacionaria:
Resina con ligandos específicos (ej. sustratos,
antígenos)
Fase móvil:
Solución acuosa
Parámetros a modificar:
Concentración de ligandos (competencia)
Fuerza iónica
15
5.- Radio hidrodinámico (tamaño)
“Cromatografía” de exclusión (no es
cromatografía)
Fase estacionaria:
Resina porosa
Fase móvil:
Solución acuosa
Parámetros a modificar:
Volumen de elución
16
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