LASERS
FUENTES
543
405
633
405
488
UV
UNIDAD DE BARRIDO
Llave Vertical
(dos posiciones, una para cada set de lásers)
No tocar!! (Se
desalinean los
lásers).
X
X
Abajo : 405/488/543
Arriba : 633/488/543
Canal 2
>570
Llave de
Espejo
Dicroico
Canal 1
< 570
Llave de filtros adentro: se interpone el
filtro
afuera: no se filtra
560-600
>510
Llave 430 - 460
de filtros
>660
Laser 488
Laser
Llave
vertical
Objetivo
Arriba
Plano del preparado
Abajo
En suma:
Llave de Espejo Dicroico
Tres
posiciones,
para
seleccionar con cuál canal se
va a detectar la emisión:
Llave Vertical
Dos posiciones, una para seleccionar con qué set de
lásers se va excitar la muestra:
Abajo : 405 – 488 – 543
Arriba : 633 – 488 – 543
- Adentro: Canal 1
- Afuera: Canal 2
- Intermedia: Ambos (< 570
va a Canal 1 y >570 va a Canal
2).
Llaves de filtros
Para filtrar la luz emitida según el espectro del fluoróforo.
Dos posiciones: adentro: se interpone el filtro
afuera: no se filtra
Los filtros instalados son:
Canal 1: 430-460 (por ej DAPI) Canal 2 :560-600 (por ej. TRICT)
>510 (por ej. FICT)
>660 (por ej. Cy5)
NOTAR QUE: Si está acostumbrado a chequear con el software la configuración, tenga
en cuenta que para FICT y afines le va a seguir indicando los filtros 510 y 530, aunque
ahora sólo usaremos el 510
Hay 10 combinaciones posibles
Las 7 combinaciones básicas y
3 más
Las 7 básicas se pueden combinar
en simultaneo con luz transmitida
Canal 2
>570
Opción 1:
Quiero ver una marcación
Con texas red o similar (rojo)
Llave de
Espejo
Dicroico:
Afuera
Láser 543 prendido
Filtro Rojo
(560-600)
Llave vertical irrelevante
Shutter abierto (software)
Llave
vertical
objetivo
Registro en canal 2 (Llave
Espejo Dicroico Afuera)
Filtro Rojo activo
Plano del preparado
560-600
Llave de
Espejo
Dicroico:
Adentro
Canal 1
< 570
Opción 2:
Quiero ver una marcación
Con FITC o similar (verde/amarillo)
Laser 488 prendido
Llave vertical irrelevante
Shutter abierto (software)
Laser 488
Registro en canal 1 (Llave
objetivo
Espejo Dicroico Adentro)
Filtro Verde Activo
>510
Plano del preparado
Llave de
Espejo
Dicroico:
Adentro
Canal 1
< 570
Opción 3:
Quiero ver azul (i.e. DAPI)
Laser UV prendido
Llave
vertical
Llave vertical abajo
Shutter abierto (software)
objetivo
Registro en canal 1 (Llave
Espejo Dicroico Adentro)
Filtros azul
activo
430 - 460
Plano del preparado
Canal 2
>570
Llave de
Espejo
Dicroico:
Afuera
Opción 4:
Quiero ver Rojo lejano
Laser 633 prendido
Filtro Rojo
(> 660)
Llave vertical para arriba
Shutters abierto (software)
Registro en canal 2
Laser 610
633
Llave
vertical
(Llave Espejo Dicroico
Afuera)
Filtro rojo lejano activo
objetivo
Plano del preparado
>660
Canal 2
>570
Llave de
Espejo
Dicroico:
Intermedia
Canal 1
Opción 5:
Quiero ver doble marcado
FITC y Rojo lejano
< 570
Laser 633 prendido
Laser 488 prendido
Llave vertical para arriba
Laser 488
Llave
vertical
Shutters abiertos (software)
Registro en canal 1 y 2
(Llave Espejo Dicroico
Intermedia)
objetivo
Filtros rojo lejano y
verde activos
>660
>510
Plano del preparado
Canal 2
>570
Llave de
Espejo
Dicroico:
Intermedia
Canal 1
< 570
Opción 6
(menos especifica que la anterior):
Quiero ver doble marcado
Con texas red o similar (rojo)
Y con FITC o similar (verde amarillo)
Laser 488 prendido
Laser 543 prendido
Llave vertical irrelevante
Laser 488
Shutters abiertos (software)
Registro en canal 1 y 2 (Llave
Espejo Dicroico Intermedia)
objetivo
Filtros Rojo y Verde activos
560-600
>510
Plano del preparado
Canal 2
>570
Llave de
Espejo
Dicroico:
Intermedia
Opción 7 :
Quiero ver texas red y
fluorescente azul (i.e. DAPI)
Decir los problemas
Canal 1
< 570
Laser UV (405) prendido
Laser 543 prendido
Llave vertical para abajo
Shutters abiertos (software)
Registro en canal 1 y 2
Laser 546
Llave
vertical
(Llave Espejo Dicroico
Intermedia)
Filtros azul y rojo activos
objetivo
560-600
Plano del preparado
430 - 460
Tres opciones mas
Dos de triple marcado
y una de cuádruple marcado
Canal 2
>570
Opción 8 (para triple marcado):
Canal 1
Quiero ver FITC, Rojo lejano y AZUL
Láser 633, 488 y UV (405) prendidos
< 570
Primera pasada
Shutters 633 y 488 abiertos (software)
Filtros rojo y verde activos
Llave vertical para arriba
Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo
Dicroico Intermedia)
>660
Laser 488
Laser 610
objetivo
objetivo
>510
LlaveLlave
vertical
vertical
Segunda pasada
Llave vertical para abajo
Shutters UV (405) abierto (software)
Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico
Adentro)
Filtro Azul activo
Plano del preparado
430 - 460
2 fluorocromos y luz transmitida
Canal 2
>570
Canal 1
Opción 9 (poco probable porque TxR y Rojo lejano cerca):
< 570 Quiero ver texas red, rojo lejano y azul (i.e. DAPI)
Laser UV (405), 543 y 633 prendidos
Primera pasada
Llave vertical para abajo
Shutters UV, 543 abiertos (software)
Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia)
Filtros azul y rojo activos
560-600
Laser 546
Laser
Laser 610
uv
430 - 460
Llave
vertical
objetivo
Segunda pasada
Llave vertical para arriba
Shutter 633 abierto
Registro en canal 2:
(Llave Espejo Dicroico Afuera)
Plano del preparado
Filtro rojo activo
>660
Canal 2
>570
Canal 1
< 570
Opción 10: Ud es exigente y quiere ver todo
Todos los Lasers prendidos
Primera pasada
Shutters 546 y UV abiertos
Llave vertical para abajo
Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia)
Filtros Rojo y UV activos
Laser 546
488
Laser
Laser 610
uv
Llave
vertical
objetivo
Segunda pasada
Shutters 633 y 488 abiertos
Llave vertical para arriba
Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia)
Filtros rojo lejano y verde activos
Plano del preparado
o si Ud prefiere al revés
puede ser también
Sequential scan con canales virtuales
3 o 4 fluorocromos y luz transmitida
NOTAR que el programa no
acepta ingresar más de dos
fluorocromos, el tercero se
especifíca después (cuando
se agrega el canal virtual)
6
Si tiene cualquier duda o piensa que necesita algún
cambio de configuración CONSULTE a la COMISIÓN.
No haga cambios sin avisar al resto!! Así evitaremos
pérdida de tiempo y hasta de preparados de todos.
Por cualquier consulta a la hora de usar el microscopio me
peden encontrar de lunes a jueves de 13 a 17hs y los
viernes de 9 a 13 hs en el interno 123 del IIBCE. Mi mail
es [email protected]
Marcela Díaz
Investigadora contratada Grado 1 del servicio de
microscopia confocal
IIBCE
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Llave Vertical