EQUIPO UTILIZADO EN HISTOLOGIA
EQUIPO UTILIZADO
EN HISTOLOGIA
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EQUIPO UTILIZADO EN HISTOLOGIA
Técnicas
Histológicas
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INTRODUCCION AL ESTUDIO
DE LA HISTOLOGIA

HISTOLOGIA
“estudio del tejido”
Es la rama de la Anatomía que estudia los tejidos
de los Animales y las Plantas
ANATOMIA MICROSCOPICA
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INMEDIATO O VITALES
PROCEDIMIENTOS
MEDIATO O POSVITALES
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TECNICA HISTOLOGICA
ES EL CONJUNTO DE PROCEDIMIENTOS
REALIZADOS PARA OBTENER UN
PREPARADO HISTOLOGICO
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SU FINALIDAD ES PREPARAR:
 CÉLULAS,
 TEJIDOS
Y
 ORGANOS
CELULAR: se alteran las membranas, lo que
produce que los elementos internos
difundan hacia el exterior.
QUÍMICO: desciende el pH y se activan los
sistemas hidrolíticos que provocan
alteraciones marcadas en los tejidos.
conociendo la anatomía, debemos dirigirnos
directamente a los órganos que nos
interesan estudiar. En el caso de que estos
sean varios, es conveniente extraer primero
los que más fácilmente se descomponen,
estos son el páncreas y la porción inferior
del tubo digestivo.
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TECNICA HISTOLOGICA
PREPARADO HISTOLOGICO:
Es una rebanada de tejido colocada sobre una lámina
portaobjetos, coloreada y cubierta por una lámina
cubre-objetos.
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TECNICA HISTOLOGICA

ETAPAS DE LA TECNICA HISTOLOGICA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
OBTENCION DEL MATERIAL
FIJACION
OBTENCION DEL BLOQUE DE PARAFINA
CORTE
COLORACION
MONTAJE
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TECNICA HISTOLOGICA
PROBLEMAS DE INTERPRETACION
al visualizar los cortes con el Microscopio
A.- ARTEFACTOS:
Cambios estructurales inducidos por las
técnicas histológicas.
B.- CONCEPTUALES
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TECNICA HISTOLOGICA
PROBLEMAS DE INTERPRETACION
A.- ARTEFACTOS:
•DE FIJACION
Precipitación de las proteínas.
•DE DESHIDRATACION Y ACLARAMIENTO
Espacios opticamente vacíos
•DE LOS CORTES
•DEL MONTAJE
cortes de diferente grosor
pliegues
•DEGENERACION POSTMORTEN
FINAL
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GRACIAS
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TECNICA HISTOLOGICA
TOMA DE MUESTRAS
Las muestras pueden ser obtenidas por:-
Frotis.
Aspiración y/o lavado
punción aspiración con aguja fina
impronta
biopsia
punción con trocar, o autopsia.
HISTOLOGIA
TEJIDOS NORMALES
ANATOMIA PATOLOGICA
TEJ. PATOLOGICOS
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TECNICA HISTOLOGICA
SI LA MUESTRA DE TEJIDO
NO SE FIJA
SE FIJA
AUTOLISIS
CONSERVA LAS
CARACTERISTICAS
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2.
FIJACION:
Es la fase en la cual se preserva la
morfología y la composición química de los
tejidos evitando la
AUTOLISIS
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TECNICA HISTOLOGICA
CONDICIONES DE UN BUEN FIJADOR:
Preservar el tejido
No producir artificios
No dificultar el tratamiento ulterior
Poder y velocidad de penetración
SOLUCION AL 40% DE ALDEHIDO FORMICO
USO
FORMOL AL 10%
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Para la FIJACIÓN DE PROTEINAS es necesario evitar su
hidrólisis, bloqueando los lugares susceptibles de hidrólisis
mediante:
- Reticularización o desnaturalización, creando redes estables
empleando aldehidos como formaldehido ,ver actuación del
formol , que se usa en solución acuosa al 2 % (formalina) para
microscopía óptica, y glutaraldehido que se emplea al 2% en
tampón, para microscopia electrónica.
- Formación de sales insolubles, mediante productos como el.
acido picrico empleado en la confección del fijador de Bouin. El
cloruro de mercurio (muy tóxico) y el dicromáto potásico.
- Cambios en el estado coloidal, mediante el calor (no
recomendable).
- Modificación del punto isoeléctrico, con ácido acético.
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

Para la FIJACIÓN DE LOS HIDRATOS DE CARBONO es
necesario evitar que se disuelvan en agua, para ello hay
que extraer el agua mediante fijadores cuya avided por
el agua sea mayor que ellos, asi se emplea alcohol
etilico (alcohol etílico al 70% en agua), y acetona.
Tienen el inconveniente que retraen los tejido y los
endurecen para el procesamiento posterior.
Para la FIJACIÓN DE LOS LIPIDOS es necesario evitar
su oxidación o enranciamiento bloqueando los lugares
donde existen enlaces - CH=CH - mediante sutancias
como tetróxido de osmio (acido osmico),ver actuación
del osmio, es el fijador ideal para microscopía
electrónica, pues se fija en los dobles enlaces de las
cadenas laterales de los lípidos de las membranas
plasmáticas, y además el Os es un metal opaco a los
electrones (sirve de tinción).
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TECNICA HISTOLOGICA
3. OBTENCION DEL BLOQUE DE PARAFINA
DESHIDRATACION
ACLARAMIENTO
IMPREGNACION
INCLUSION EN PARAFINA
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3. OBTENCION DEL BLOQUE DE PARAFINA
TEJIDOS (Ricos en agua)
DESHIDRATACION
TEJIDOS RICOS EN ALCOHOL
ACLARAMIENTO
TEJIDOS RICOS EN XILOL
IMPREGNACION EN PARAFINA
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TECNICA HISTOLOGICA
Luego de la Impregnación se Incluye en
parafina, en pequeños cubos que forman el
BLOQUE DE PARAFINA
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TECNICA DE CORTE.
 - La obtención de rebanadas (cortes) de cuerpos
sólidos, tiene por objeto el observar secciones
translucidas de sus estructuras inernas. Los cortes
demasiado gruesos permiten observar mas
estructuras, pero con menos definición pues se
superponen unas a otras. Los cortes finos pèrmiten
ver menos estructura, pero con mas definición y
finura.

- Para obtener cortes del cuerpo solido, se necesita
que este posea un grado de dureza minimo, y
proporcional a la finura de la rebanada que deseemos
obtener: mas duro = mas fino.
- Como la mayoría de los tejidos corporales son
blandos, es necesario endurecerlos mediante las
siguientes estrategias:
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
1ª- Fijación en glutaraldehido: Ideal para cortes
gruesos a mano alzada, mediante el microtomo de
mano y navaja barbera (0,5- 3 mm de grosor), o
mediante vibratomo.(0,5- 1 mm de grosor).

2ª- Congelación en microtomo: -2 a -5 ºC. Ideal para
hacer preparaciones rápidas, p.e. peroperatorias en
antequirógfano.(50-100 micras de grosor)

3ª- Congelación en criostato: -15 a -30 ºC. Ideal para
cortes finos en histoquímica.(5-20 micras de grosor)
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
4ª- Inclusión en Parafina: Ideal para trabajo de
cortes en serie y de alta estabilidad. Rutina de
laboratorio.(5-20 micras). Los cortes se realizan
en un aparato llamado microtomo de parafina
(imagen derecha), La la pieza, en amarillo, se
coloca en un brazo que se desliza verticalmente
sobre una cuchilla, en azul, recubierta por un
antirroll (antienrrollamiento) en azul mas claro.
 5ª- Inclusión en celoidina: Ideal para grandes
piezas: p.e. Pulmon entero. Cerebro entero,
etc.(100-200 micras)
 6ª- Inclusión en resinas epoxi: araldit, vestopal,
etc Ideal para microscopía electerónica (20-40
nm) y corte de objetos extremadamente duros:
hueso y diente. Se corta en el
ultramicrotomo.mediante cuchillas de vidrio
odiamante..
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B.- Se coloca en el Baño de María
4. EL CORTE
C.- Se monta el corte en la
lámina Portaobjetos
A.- Se corta en el microtomo
EJEMPLOS
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TECNICA HISTOLOGICA
5. COLORACION:
COLORANTE
ES UNA SUSTANCIA CAPAZ DE
COMUNICAR SU COLORACION
A OTROS CUERPOS
La coloración más usada es
HEMATOXILINA - EOSINA
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TECNICA HISTOLOGICA
BATERIA DE COLORACION
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TECNICA HISTOLOGICA
5. COLORACION
EOSINA
Colorante ACIDO,
tiñe de
Rosado o Rojo
elementos básicos
Ej. Citoplasma
HEMATOXILINA
Colorante BÁSICO
tiñe de
Azul o púrpura,
elementos ácidos
Ej. El Núcleo
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TECNICA HISTOLOGICA
PASOS DE LA COLORACION
 DESPARAFINAR
 REHIDRATAR
 HEMATOXILINA
 DIFERENCIAR
 EOSINA
 ALCOHOL
 XILOL
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TECNICA
DEL PAS ( Peryodic Acid Schiff) Para detectar
enlaces 1-2 glicol (mucopolisacaridos)
Y AZUL ALCIAN (mucopolisacaridos ácidos). -Ver actuacion del
PAS.1º.- Desparafinar e hidratar los cortes.
2º.3º.4º.-
Solución de azul alcian.-------------------------------10 min.
Lavar en Agua destilada .
Sol. de ácido peryódico .-----------------------------10 min
5º.- Lavado con Agua destilada.
6º.- Solución dc Schiff.------------------------------------30 min
7º.- Lavado con agua sulfurosa 1 mm., agua destilada- 1 mm.
y repetir varias veces.
8º.- Lavar con agua corriente hasta que tome color rojo -- 30
min.
9º.- Teñir con Hernatoxilina (contraste de núcleos)----------2 min.
10º.- Lavar, deshidratar, aclarar y montar.
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El acido peryódico (I04H) reaciona con los
enlaces 1-2 glicol (-CHOH-OHHC-)
transformándolos en aldehídos (-COH HOC-)
donde se fija el reactivo se Schiff F(SO3H)2
El ácido peryódico no actúa cuando los grupos
glicol están bloqueados por radicales ácidos
Solución de azul alcian:Azul
alcian---------- 1 gr.
Acido acético------- 3 c.c
Agua destilada----- 97 c.c
Solución de Acido
IO4H -------------- 1 gr.
Agua destilada.-- 100 ml.
Solución de Schiff:
Hervir 100 c.c. de agua destilada, apartarla del fuego y
añadir 1 gr. de fucsina básica. A los 5 mm. añadir 1,5 gr. de
metabisulfito sódico potásico Na2O3S2 y 3 c.c. de CIH
normal, tapar el recipiente y dejar reposar durante 24 horas.
en oscuridad. Depurar con carbón y filtrar. Si toma color
paja, tira.r
Agua sulfurosa:
Metabisulfito sódico, SO3HNa, ----0,5
gr.
AD------------------------------ 100 ml.
CIH-----------------------------3-4 gotas
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CORTES HISTOLOGICOS
HEMATOXILINA-EOSINA
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Hematoxilina y Eosina.

1º.- Las láminas ya hidratadas se cubren con la
Solución de hematoxilina durante 5 minutos.
2º.- Se lavan varias veces con agua durante un total
de 15 minutos como mínimo.
3º.- Se cubren con la Solución de eosina durante 5
mm.
4º.- Lavar rápidamente.
5º.- Deshidratar con alcoholes de concentraciones
crecientes 70%, 90%, 100% (deshidratar).
6º.- Aclarar en xilol y montar cl cubre con bálsamo del
Canadá (aclarar y montar).
RESULTADOS
La cromatina nuclear y compuestos basófilos aparecen en
azul por la hematoxilina.
El citoplasma, colágeno y compuestos acidófilos se tiñen
en rosa o rojo por la eosina.
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CORTES HISTOLOGICOS
Tejido adiposo con distintas coloraciones
SUDAN
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SUDAN ROJO PARA TEÑIR LIPIDOS SIMPLES.
 1º.- Cortes obtenidos por congelación (La inclusión en
parafina disuelve las grasas).

2º.- Introducir los cortes en la mezcla a partes iguales
de Sudan III (saturación en Alcohol de 70º.) y Rojo Escarlata (saturación en
alcohol de 70º .) (filtrado). 24 horas.
 3º.- Lavar en agua destilada.
 4º.- Teñir los nucleos con Hematoxilina de Groat--2
minutos.

5º.- Lavar y secar con papel de filtro.
 6º.- Montar en Plasdona.
Hematoxilina de Groat
Una parte
de:
Acido sulfurico concentrado--------0.8 ml.
Alunbre Férrico-------- 1 gr.
Agua destilada --------- 50 ml.
Dos partes
de:
Hematoxilina--0.5gr.
Alcoholde 95º- 50ml
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COLORACIONES ESPECIALES
IMPREGNACION ARGENTICA
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COLORACIONES ESPECIALES
AZAN MODIFICADO
GIEMSA
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TECNICA HISTOLOGICA
6.
MONTAJE
Con un pegamento especial
se coloca el Cubreobjeto
sobre el tejido que se
encuentra en el portaobjeto
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Finalmente, cubrimos los "portas" con una
delgada lámina de vidrio (cubreobjetos) en
la cual colocamos una gota de medio
adhesivo.
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La parafina se coloca en una
estufa a 70º C, con lo que se
licua, introduciendo en ella la
pieza que ha permanecido en
benzol.
Se deja toda la noche en la
parafina
A la mañana siguiente sacando la
pieza de la estufa con parafina
líquida y se confecciona el bloque,
dejándole solidificar a temperatura
ambiente
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Una vez que
el bloque se
ha
endurecido
se adhiere
sobre un
taco de
madera, por
medio de
espátula
caliente
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El bloque
endurecido se
instala en el
micrótomo de
parafina,
procediéndose al
corte (Fig. N° 5).
MICRÓTOMO
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Los cortes obtenidos, se extienden con ayuda de un
pincel sobre el agua de un baño con agua caliente,
pescándolo sobre un porta que se introduce por
debajo
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Una vez que han
sido extraídos
del baño María,
se proceden a
montar en el
portaobjetos.
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Los portas con los
cortes se introducen
inclinados en la estufa
de 70º C para que se
licue la parafina
sobrante y escurra.
Se introducen en un recipiente con
xilol para que la parafina se
disuelva.
El corte libre de parafina es
necesario hidratarlo para que se
pueda proceder a su coloración.
La hidratación sigue un proceso
inverso a la deshidratación.
Se pasa por alcoholes de
concentraciones decrecientes,
terminando en agua igual que en
el proceso de corte por
congelación
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ACTUACION
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Fijador de Bouin
Aciclo pícrico a saturación-----------1.000 ml..
Acetato de cobre----------------------- 25 gr.
Formalina (formol comercial al 10%---- l00 c.c
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ACTUACION
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