Caracterización bioquímica del veneno de Bothriechis
schlegelii (Serpientes: Viperidae)
1Leonel
Montealegre,
Pontificia Universidad Javeriana-Cali
Dirección Académica General
Coordinación Institucional de
Investigación
1,2Nora
Céspedes, 2Eliecer Jiménez, 3Diana Hermith 4Fernando Castro,
1,2Myriam Arévalo-Herrera y 1,2Sócrates Herrera
Instituto de Inmunología, Universidad del Valle, Calle 4B No 36 – 00 Cali, Colombia
2Centro Internacional de Vacunas, Cra. 37 – 2Bis No. 5E-08 , AA 26020 Cali, Colombia
3Programa de Biologia, Departamento de Ciencias, Naturales y Matematicas, Pontificia Universidad Javeriana
4 Grupo de Herpetología, Universidad del Valle , Calle 13 No 100-00 Cali, Colombia
1
.
Introducción
Diseño experimental
El accidente ofídico es un problema de salud global y en Latinoamérica el
envenenamiento botrópico es el caso mas frecuente. En Colombia, el Instituto
Nacional de Salud (2007) estima una incidencia de aproximadamente 7 accidentes
ofídicos por cada 100.000 habitantes, los cuales son causados en su mayoría por
especies de la familia Viperidae (alrededor del 90% de los casos). En general, el
cuadro clínico que se desarrolla está asociado con daños locales rápidos y
prominentes (edema, dolor, sangrado, necrosis), seguidos de alteraciones
sistémicas como coagulopatías, choque cardiovascular e insuficiencia renal aguda.
El presente trabajo fue realizado por el Centro Internacional de Vacunas en conjunto
con el programa de Biología de la Pontificia Universidad Javeriana.
Los efectos tóxicos de las mordeduras de serpiente se deben al contenido de sus
venenos, los cuales son mezclas complejas de componentes como polipéptidos y
proteínas hidrofílicas. Algunas de estas proteínas presentan actividad enzimática y
pueden contribuir a la acción digestiva del veneno (Tabla 1).
Sin embargo, en Colombia se conoce poco acerca de las propiedades químicas y
funcionales de los venenos. Esta situación es evidente en el caso particular de la
especie Bothriechis schlegelii, con la cual se reportan entre el 5-10% de los
accidentes en el país.
caracterización
Pruebas de actividad
bioquímica
In vivo
In vivo
In vivo
In vivo
In vitro
In vitro
EFECTO
Perfiles proteicos
Letalidad (DL50)
SDS-PAGE
Edematizante
2-DE
Desfibrinante
HPLC
Hemorrágica
Fracciones
Coagulante
Identificación
Hemolítica Indirecta
LC/MS/MS
Resultados

Tabla 1. Efectos farmacológicos de las toxinas presentes en los venenos de serpientes.
COMPONENTE
VENENO TOTAL Bothriechis schlegelii

Glucoproteinas
Existe variación individual en la composición proteica (Figura 2) y en la
funcionalidad (Figuras 3 y 4, Tabla 2) de los venenos de B. schlegelii
Los venenos de B. schlegelii analizados son hemolíticos, con actividad
coagulante y desarrollan edema pronunciado a los pocos minutos de la
inoculación. No producen hemorragia ni poseen actividad desfibrinante.
Reacciones anafilácticas
CINÉTICA ACTIVIDAD EDEMATIZANTE
Proteinas de alto peso molecular
MP
Hembra 1
Hembra 2
Macho
250kDa
Polipeptidos
Proteinas enzimáticas
Neurotoxinas
Cardiotoxinas
Paralisis respiratoria
Depresion cardiovascular
Proteasas
Citolisis
Fosfolipasas
Hemolisis
Hipotension arterial
Metalloproteinasas
Inhibicion y/o activacion
Fallas renales
Proteasas de serina
de la coagulación
agudas
Acetilcolinestarasas
Hemorrágias
Miotoxinas
150
Control
100
Hembra 1
Hembra
Macho 2
75
50
Figura 3. Actividad edematizante de los venenos de B. schlegelii
en el transcurso de un día.
37
Tabla 2. Resultados de las actividades desfibrinante y coagulante
de los venenos de B. schlegelii
Bothriechis schlegelii (Viperidae)
25
ACTIVIDAD
Hembra 1
Hembra 2
Macho
Desfibrinante
Ausente
Ausente
Ausente
Coagulante
(DCM)1
84µg
82µg
155µg
20
A
B
15
Figura 2. SDS-PAGE venenos B. schlegelii
1DCM
= Dosis Coagulante Mínima = Cantidad de veneno (µg) que
produce coagulación de plasma humano citratado en 60 segundos.
MP
Hembra 2
Macho
DHeIM2 -> 8.1µg
DHeIM2 -> 25.6µg
Hembra 1
DHeIM2 -> 3.4µg
Figura 1. A) Distribución geográfica de B. schlegelii en Colombia.
Modificado de Campbell & Lamar (1989). B) Ejemplares de la
especie B. schlegelii.
Bothriechis schlegelii es una especie que se caracteriza por tener una amplia
distribución a lo largo de América Central y Colombia (Figura 1). Tiene un estilo de
vida arbóreo y se alimenta de ranas, lagartos, pequeñas aves y roedores.
pET24a
B1
B3
pET24
+ Nde I
pET 24
+ Xho I
Objetivos
381 pb


306 pb
Figura 4. Actividad Hemolítica Indirecta de los venenos de B. schlegelii.
2 DHeIM: Dosis Hemolítica Indirecta Mínima = Cantidad de veneno (µg) que produce halo hemolítico
de 20mm de diámetro.
Los resultados del presente trabajo son preliminares, sin embargo representan un
avance muy importante en el conocimiento de la composición y efecto de los
venenos de serpientes de la especie B. schlegelii procedentes del suroccidente de
Colombia, teniendo en cuenta la alta variabilidad encontrada en los venenos de esta
especie alrededor de Latinoamérica.
375 pb
Determinar los perfiles de proteínas de venenos de B. schlegelii.
Evaluar la actividad funcional de venenos de serpientes B. schlegelii, de
acuerdo con el cuadro clínico general que desarrollan los venenos de las
serpientes de la familia Viperidae.
Perspectivas
Determinar e identificar las proteínas responsables de la actividad funcional
observada en los venenos de B. schlegelii.
Evaluar la capacidad de anticuerpos generados contra el veneno de neutralizar
cada uno de los efectos encontrados.
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