Objetivo:
◦ Realizar una tinción negativa.
 Principios:

◦ Una tinción negativa requiere el uso de un tinte ácido
como lo es el India ink o nigrosina.
◦ La tinción acídica con el cromógeno cargado
negativamente, no podría penetrar a la célula debido a
la carga negativa en la superficie de la bacteria.
1

Principios:
◦ Por lo tanto, las células no teñidas son fácilmente
detectadas contra el fondo de color.
◦ La aplicación parcial de la tinción negativa es doble.
Ya que no se requiere la fijación de calor y la célula
no están sujetos a los efectos distorsionadores de los
productos químicos y el calor, su tamaño natural y la
forma pueden ser vistos.
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
Principios:
- Además, es posible
observar bacterias
que son difíciles de
teñir , tales como
algunos espirilos.
• Materiales:
◦ Cultivo de 24 horas
◦ Tinte ácidico
(nigrosina)
◦ Mechero
◦ “Loop” de inoculación
◦ Bandeja de tinción
◦ Microscopio
◦ Papel de lente
◦ Porta objeto
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
Procedimiento:
◦ Vierta una gota del tinte ácidico cerca de uno
de los extremos del lado limpio de la laminilla.
4

Procedimiento:
◦ Utilizando técnicas estériles, colocar con el
loop parte del cultivo de la bacteria en la gota
del tinte y mezclar.
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◦ Con el borde de la segunda laminilla mantenga a
un ángulo de 45 grados y colocado delante de la
suspensión bacteriana, empujar la mezcla para
formar una capa delgada.
◦ Séquelo al aire (NO caliente)
◦ Examine en microscopio.
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Bacillis
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• Conceptos básicos sobre la base química de la
tinción de la cápsula.
• El procedimiento para distinguir el
material cápsular de la célula bacteriana.
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• Cápsula:
• Es una capa gelatinosa externa que es secretada por
la célula que rodea y se adhiere a la pared celular.
• No es común en todos los organismos.
• Células con cápsula fuerte suelen ser más virulentos.
• Causan enfermedades.
• Están protegidos de la fagocitosis.
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• cápsula:
• Se componen de azúcares y proteínas.
• No es vital, pueden tenerla como no pueden tenerla.
• La tinción de cápsula se denomina como una tinción
negativa.
• Ya que se tiñe el fondo de la preparación y no el
organismo.
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• La tinción es muchos más difícil:
• El material de la cápsula es soluble en agua.
• El tinte puede ser removido por los lavados vigorosos.
• Se utilizan dos tintes:
• Cristal Violeta: Célula y cápsula cogen el color oscuro.
• Sulfato de Cobre: Sirve como agente de lavado,
despinta la cápsula y se fija a la cápsula. Se verá azul
en contraste con el color violeta oscuro de la célula.
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•
Materiales:
•
•
•
•
•
Cultivo de 48 horas
Cristal violeta
Sulfato de Cobre 20%
Laminilla
◦
◦
◦
◦
◦
Mechero
Loop” de inoculación
Microscopio
Papel de lente
Porta objeto
Procedimientos:
• En una laminilla limpia, coloque varias gotas de cristal
violeta.
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•
Procedimiento:
• Utilizando técnicas asépticas añada
con el loop parte del cultivo al
tinte.
• Regar la muestra de forma
uniforme hasta quedar una capa
fina y déjelo de 5-7 min.
• Dejar secar al aire. NO FIJAR POR
CALOR
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Lavar con sulfato de cobre al 20 %.
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• Dejar secar el extendido al aire.
• Observar al microscopio bajo objetivo de
inmersión.
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Tinción Negativa