EVALUACION DE ECOTOXICIDAD MEDIANTE EL EMPLEO DE ALGAS
AISLADAS DEL RIO URUGUAY
Storino A., Parise C., Planes E.*
INTI Química
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1. OBJETIVO
Los estudios de toxicidad empleando algas verdes unicelulares
se encuentran entre los más utilizados para la evaluación de la
ecotoxicidad de efluentes, cursos de agua contaminados y
sustancias químicas. La cepa de alga empleada para realizar
ensayos normalizados es de origen europeo (Pseudokirchneriella
subcapitata); en los casos que se desea evaluar un sitio
específico, se recomienda usar especies que sean propias de
ese ambiente.
El objetivo del trabajo fue desarrollar un método para evaluar la
toxicidad en muestras ambientales con una cepa aislada en
nuestro laboratorio a partir de agua del Río Uruguay.
Ensayo con sulfato de cinc
El ensayo consiste en determinar la inhibición del crecimiento de un
cultivo del alga aislada al ser expuesto a distintas concentraciones
de sulfato de cinc.
Se prepararon soluciones con distintas concentraciones (de 1000 a
2 µg/l) de sulfato de cinc, y se inocularon con el número de algas
necesario para alcanzar una densidad celular inicial de 100.000
células de alga por mililitro y sus respectivos controles. Se incubaron
durante 72 hs a 28º C, bajo luz blanca continua. Al finalizar el
período de incubación se realizó el conteo de algas en cámara de
Newbauer.
La concentración de cinc de la solución a partir de la cual se
prepararon las distintas diluciones se determinó por espectrometría
de absorción atómica.
2. DESCRIPCIÓN
Se realizó el aislamiento y la purificación de una cepa de alga
unicelular, a partir de una muestra de agua del Río Uruguay tomada
por INTI-Ambiente en la zona cercana a Concepción del Uruguay
durante el mes de junio del año 2009.
Se estudió el crecimiento del alga aislada en medios de cultivo
sintéticos y se evaluó la respuesta de la cepa al sulfato de cinc,
empleado como sustancia de referencia para establecer la
sensibilidad de la cepa frente a la acción tóxica de una sustancia.
Se determinó para cada concentración la tasa de crecimiento
específica y la inhibición de la tasa de crecimiento respecto del
control; se calculó la concentración inhibitoria 50 (CL50) que es la
concentración de cinc que inhibe en un 50% la tasa de crecimiento.
Pseudokirchneriella subcapitata
Aislamiento y purificación de la cepa de alga
Se realizó un cultivo de la muestra de agua de río en un medio
líquido, el cual se incubó durante una semana a 24º C, bajo luz
blanca continua.
La separación de la cepa de alga de la flora acompañante, se
realizó a partir del cultivo líquido, en agar para crecimiento de
algas; se tomaron las colonias de color verde bien definidas y se
realizaron sucesivos pasajes, hasta lograr un cultivo puro de algas.
Se verificó la pureza de la cepa mediante la observación
microscópica y el recuento de microorganismos; se conservó la
cepa en tubos con agar algas y en cultivos líquidos con los cuales
se realizaron los ensayos.
Ensayo con sulfato de cinc con algas aisladas del Río Uruguay, controles y
concentraciones ensayados
Concentración inhibitoria 50 (CL50) = 140 µg/l
3. LOGROS Y RESULTADOS
La cepa aislada creció en forma satisfactoria en un medio de
cultivo sintético. Fue identificada dentro del género
Pseudokirchneriella.
El método desarrollado puede aplicarse para evaluar tanto
muestras ambientales como sustancias químicas puras.
El resultado obtenido con el tóxico de referencia (cinc) muestra
que la cepa aislada es más resistente a la acción tóxica del cinc
que la cepa empleada para realizar ensayos normalizados.
Si bien ambas pertenecen al mismo género, pueden existir
diferencias en la sensibilidad a un mismo compuesto entre las
cepas que expliquen estos resultados. Se continuará trabajando
con esta cepa para estudiar su respuesta a otras sustancias y a
muestras ambientales.
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TITULO DEL PROYECTO