Tinción de esporas, tinción de
flagelos y otras pruebas para
identificar bacilos Gram-positivos
POR:
ANGÉLICA AQUINO
MARÍA GARRIGA
MERARIS SOTO
LUIS E. OQUENDO
Bacilos Gram +
CATALASA -, NO FORMADORES DE ESPORAS
 Hay tres especies de Erysipelothrix:
 Erysipelothrix rhusiopathiae
 Erysipelothrix tonsillarum
 Erysipelothrix inopinata
 Erysipelothrix rhusiopathiae es la única que causa
enfermedades en humanos
 Gram-positiva
 Catalasa negativa
 No formadora de esporas
 Tiende a formar largos filamentos
 No motiles
 Ureasa negativo
 Erisipeloide
 Produce H2S
http://www.actasdermo.org/es/forma-cutanea-difusaerisipeloide/articulo/13052968/
 Sensible a:
 Penicilina
 Cefalosporinas
 Eritromicina
 Clindamicina
 Resistente a:
 vancomicina
http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet
/BiologyPages/A/Antibiotics.html
 Deben ser cultivadas en caldo nutriente con:
 1% de glucosa
 5% de CO2
 A 35 ˚C
 También crece en agar chocolate y agar sangre
 En agar sangre las colonias son no hemolíticas
 Después de 48h de incubación se ven dos diferentes
tipos de colonias
 Pequeña, forma lisa transparente, reluciente y
bordes enteros
 Grande, colonias ásperas, estructura curvea, bordes
irregulares
 Aracnobacterium, 9 especies
 Aracnobacterium haemolyticum
 Aracnobacterium pyogenes
 Aracnobacterium bernardiae
 Catalasa negativa
 Agar Sangre
 Beta-hemólisis
Tinción de Flagelos
Tinción de flagelos
 Los flagelos son órganos de locomoción
 Los flagelos están compuestos por cerca de 20
proteínas, con aproximadamente otras 30 proteínas
para su regulación y coordinación
 La flagelina es la principal del flagelo
 Tiene su origen en el protoplasma de la célula
bacteriana
Tipos de flagelos
Métodos
 Kodak
 Cubrir la preparación durante 5 a 10 minutos
 Lavarlo por 2 ó 3 minutos
 Observar la placa de la periferia hacia el centro
 Método Leifson
 Fuscina básica en alcohol etílico
 Acido tánico en agua destilada
 Cloruro de sodio en agua destilada
 Tinte RYU
 Se utiliza en el borde del cubreobjetos
 Después de 5 a 10 minutos se examina la muestra
Bacilos Gram +
NO FORMADORES DE ESPORA,
ACTINOMICETOS AERÓBICOS FILAMENTOSOS
Actinomicetos
 Grupo heterogéneo
 Bacterias filamentosas
ramificadas
 Similar al crecimiento de
hongos
 Aerobios / Anaerobios
facultativos
 Crecimiento lento
 No motil
“Acid-fast stain”
http://www.biotechinfo.in/study-material-/acid-fast-staining-by-ziehl-neelsen-method/
“Acid-fast Stain”
http://www.highlands.edu/academics/divisions/scipe/biology/labs/ro
me/acid_fast_stain.htm
http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/Lab%20Stuff
/Stains/Bacterial%20Stains.htm
Nococardia spp.
 Presente en suelo y en
material vegetativo
 En humanos causa
infecciones

 No motil
 Parcialmente ácido-
pulmonares y subcutáneas
sistémica
 afección al Sistema
Nervioso Central

resistentes



Se utiliza prueba
modificada
Utiliza ácido débil
(0.5% a 1% H2SO4)
 La infección progresa
rápidamente
Otros Actinomicetos
Actinomadura spp.
Gordonia spp.
 A. madurae se
 Reduce nitrato
diferencia por ser
Xilosa positivo
 No tiene micelio
 No motil
 Parcialmente ácido-
resistente
Rhodococcus spp.
 R. equis
 Parcialmente ácido-
resistente.
 Se diferencia por exhibir
colonias rosa-salmón en
Agar Sangre

Parecido a Klebsiella
http://people.upei.ca/jlewis/html/lab_4_coryn
e-_mycobacterium.html
Identificación Actinomicetos
Bacilos Gram +
FORMADORES DE ESPORAS, NO
FILAMENTOSOS, CATALASA +
Esporas
 Resistentes a condiciones
Clostridium difficile
ambientales adversas.
 Organismos que
producen esporas:



Hongos
Plantas
Bacterias
http://promocionxxii.med-unjfsc.edu.pe/2011/10/generoclostridium.html
Formación de esporas
Tinción de Esporas
1.
Fijar la bacteria en la laminilla.
2. Colocar un pedazo de papel toalla en la laminilla.
3. Echar verde malaquita sobre el papel toalla.
Tinción de Esporas
4. Calentar la laminilla por 5 minutos.
5. Lavar el frotis con agua destilada.
6. Cubrir el frotis con safranina por 30 segundos.
Tinción de Esporas
7. Lavar con agua destilada y secar.
http://textbookofbacteriology.net/Anthrax.html
B. anthracis
Bacilos formadores de esporas
 Gram positivos
 Catalasa positivos
 Aeróbicos / Anaeróbicos facultativos
 Muchas de las especies crecen en Agar de Sangre
 Bacillus spp. & Clostridium spp.
Bacillus spp.
 B. anthracis



No motil
No fermenta lactosa
Infecciones humanas
 B. cereus



Infecciones humanas
Motiles
Beta hemolítico
 B. thuringienses


Insectos
Beta hemolítico
 B. subtillis


Beta hemolítico
Aspecto liso, mucoide o
rugoso
B. anthracis
 Son grandes, grises y planas.
 En Agar Sangre no son hemolíticas.
 Son halófilas y crecen en medios alcalinos.
 Susceptibles a penicilina, fluroquinolinas, entre otros.
B. anthracis
http://biogefahr.shopkeeper.de/cgi-bin/nw/biogefahr-de/
“Medusa head”
B. cereus
 Tiene dos enterotoxinas


Emética
Diarrea
 Crece a 37˚C en Agar
Sangre.
 Resistentes a penicilina.
 Susceptible a vancomicina
y clindamicina.
Figura 16-19 Bacillus cereus en Agar
de Sangre
Identificación de Bacilos
Gram + Aeróbicos
BACILOS CATALASA +, NO FORMADORES DE
ESPORAS Y NO FILAMENTOSOS
Características Generales
 Se encuentran en el ambiente (agua y suelo) con
facilidad.
 No se consideran altamente patogénicos, mas sin
embargo se están aislando en infecciones clínicas con
mayor frecuencia.
 Unos pocos son menos comunes, mas causan
enfermedades severas.
Diagrama de Identificación
Corynebacteria
 C. (ulcerans, diphtheriae,
pseudotuberculosis)



Catalasa +
No motil
CTBA (medio) forman “halo”
marrón
 C. diphtheria




No produce ureasa
Fermenta glucosa y maltosa
Reduce nitrato a nitrito
Prueba de Elek para detectar
toxina
Elek’s Test
 Corta papel de filtro de
75% diámetro de plato de
agar y 2 cm de ancho.
 Saturar con antitoxina C.
diphtheria y esperar que
seque.
 Añadir suero de conejo y
“potassium tellurite” al
agar caliente.
Elek’s Test
 Coloca los papeles en el
plato de agar caliente y
deja que llegue al fondo.
 Luego de sólido, añade
el organismo y pon
paralelo a este, controles
negativos y positivos.
 Incubar de 18- 24 horas.
Identificación de C. diphtheria
Rothia and Listeria
Rothia spp.
Listeria monocytogenes
 Cocos Gram +
 Bacilos Gram +
 Disimulan ser Bacilos
 Familia Listericea
 Familia Micrococcacea
 Nitrato +
 No motil
 Hidrolizan esculina
 Ureasa Negativa
 2/3 catalasa +
 Catalasa +
 Hidrolizan esculina
 Motiles
 B-hemolíticos
 Crece en 6.5% NaCl
Resultados de Pruebas
Bioquímicas
IDENTIFICACIÓN Y DIFERENCIACIÓN DE
BACILOS GRAM POSITIVOS
Pruebas de Identificación
http://es.slideshare.net/jmhr23/bacilos-gram-positivos-aerobios-no-esporulados
Pruebas de Identificación
https://www.scribd.com/doc/28806551/Bacteriologia-diagnostica
Pruebas de Identificación
Tabla 1 – Identificación y Diferenciación de géneros relacionados
Pruebas
Listeria
Lactobacillus
Erysipelothrix
Cocobacilos
Bacilos
Bacilos
Catalasa
+
-
-
Vancomicina
S
R
R
+
(flagelos)
-
-
-
-
+
Bilis Esculina
+
-
-
NaCl 6.5%
+
-
-
B hemólisis
V
-
-
Microscopia
Motilidad
H2S
S – Susceptible, R – Resistente, V - Variable
http://bvs.panalimentos.org/local/file/Manual_Listeria_monocytogenes_2008.pdf
Pruebas de Identificación
http://bvs.panalimentos.org/local/file/Manual_Listeria_monocytogenes_2008.pdf
Pruebas de Identificación
Diferenciación de especies del género Bacillus
Pruebas
B. firmus
B. subtillis
B. sphaericus
+
+ (central)
+
+
+ (central)
+
+
+ (central)
+
+
Hidrólisis de almidón
+
+
-
Citrato
Crecimiento NaCl 7%
+
+
+
d
Reducción Nitrato
Crecimiento anaeróbico
d
-
+
-
-
Fermentación Glucosa
L-arabinosa
D-xilosa
D-manitol
Ureasa
Motilidad
VP
Indol
+
+
+
-
+
+
+
+
+
-
+
-
Catalasa
Espora
Oxidasa
Licuefacción de gelatina
d – Reacción débil
http://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis404.pdf
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Tinción de esporas, tincion de flagelos y otras