Incidence of Clostridium botulinum
spores in honey in Turkey
Leopoldo García Baeza
Introducción

El botulismo alimentario es una de intoxicación
alimentaria grave causada por la ingestión de
alimentos que contienen la potente neurotóxina
formada durante el crecimiento de Clostridium
botullinum.

Clostridium botulinum y sus esporas están
ampliamente distribuidos en la naturaleza
(Solomon y Lilly,2001 ) .

El botulismo infantil es la forma común de
botulismo y la miel se ha identificado como una
fuente potencial de infección ( Midura , 1996 ) .

La flora intestinal infantil inmadura permite que
esporas ingeridas germinen , se multiplican y
produzcan neurotóxinas del botulismo en el
lumen intestinal .

Los niños de entre 2 semanas y 1 año son los más
susceptibles ( Arnón, Damus , y Chin , 1981 ) .

La miel se ha identificado tanto como la dieta
factor de riesgo de botulismo infantil y como un
reservorio natural de C. botulinum y esporas de
tipo B ( Solomon y Lilly , 2001 ) .

La incidencia de las esporas de C. botulinum en la
miel tiene , se ha estimado en varios estudios .

Sugiyama , Mills, y C athy Kuo ( 1978 ) , usando un
método de diálisis , informó que 18 de 241 muestras
de miel contienen las esporas,

Midura , Snowden , Wood y Arnón ( 1979 ) ,
utilizando un método de dilución de centrifugación ,
encontraron 9 de 90 muestras de miel positivos.

Rall , Bombo , Lopes, Carvalho, y Silva ( 2003 ) aisló
esporas de C. botulinum 3 de 100 muestras de miel .

Solomon y Lilly ( 2001 ) reportó 13 % de
las muestras fueron C. botulinum positivo.

Por esta razón, la FDA y los CDC
recomiendan que los niños menores de 1
año no consumir miel.

El propósito de este estudio fue
determinar la incidencia de C. botulinum
en mieles comerciales obtenidos en
Ankara y para alertar a los pediatras.
Materiales y metodos

48 muestras de miel:
6 panal de miel.
 34 flor de miel.
 8 de mielada.


Se obtuvo en los mercados de Ankara.


Se utilizaron:
Carne Cocida Medio (CMM, Merck) y
Tripticasa Peptona Glucosa Yeastbrot h
(TPGY, Merck) (Solomon, Johnson, Bernard,
Arnón, y Ferreira, 2001).

Método de DA (adición directa)

10 g de miel se añade directamente a 90 ml
de CMM y TPGY y se incubaron en un agua
baño a 65 ° C durante 30 minutos para
inactivar los no formadores de esporas.

En el método DC (dilución
centrifugación).

25 g de miel se diluyeron en 100 ml de
agua destilada estéril con 1% de Tween 80
(Merck, Darmstadt, Alemania) y se agitó
hasta que la solución se volvió
homogénea.

La solución se mantuvo a 65 °C agua
baño durante 30 minutos de centrifugado
durante 30 minutos a 9 000 g

Los precipitados se transfirieron a 9mL de
CMM y9 mLTPGY.

Método SF (sobrenadante filtración).

La filtración por membrana se combinó
con la centrifugación.

Las esporas fueron capturados a partir
del sobrenadante por filtración a través
de un filtro de 0.45 μm.

El filtrado se inoculó en 9 ml de TPGY y 9
ml de CMM.

Cada muestras se ensayaron dos veces.

Todos los medios fueron cubiertos con
aceite de parafina estéril.

CMM se incubó a 35 ° C y TPGY a 26 ° C
durante 7-10 dias (Solomon et al., 2001).

Después de 7 días de incubación, se examinó
cada cultivo para la producción de la
turbidez y de gas.

Los cultivos que mostraron ningún
crecimiento significativo con en 7 días se
volvieron a incubar durante 3 días para la
tarde germinación de las esporas.

Después de 10 días de incubación, los
cultivos sin signos de crecimiento se
consideran negativos.

Células clostridiales típicos tienen un
aspecto similar a una raqueta de tenis con
la tinción de Gram.

Las muestras positivas se sembraron en
medio anaeróbico Agar Yema de Huevo
(AEY, Oxoid).

Las placas se incubaron anaeróbicamente
a 35 °C durante 48 h.

Al final del tiempo de incubación fueron
resembradas por duplicado en AEY agar.

Uno se incubó aeróbicamente y el otro
anaeróbicamente a 35 ° C durante 48h.

Se consideraron colonias que crecieron
sólo en condiciones anaerobias como
cultivos puros.
Las toxinas se detectaron utilizando el
bioensayo en ratones. presencia de C.
botulinum.
 Se inocularon vía intraperitoneal (IP) 0.5
mL de centrifugado en dos ratones
blancos.
 La muerte de los ratones sin signo clínico
en las primeras 24 h fue considerada por
la falsa manipulación (Salomón et al.,
2001).

Resultados

Se aislaron 6 esporas de C. botulinum (4
de flor miel, 1 de miel de mielada, 1 de
peine de la miel de la flor) a partir de 48
muestras.

La miel se vende en los mercados de
venta al por menor en Ankara esta
significativamente (12,5%) contaminada
con C. botulinum.

Siendo comúnmente consumida por
todas las edades.
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