Revisión de las metodologías
actuales para aislar e
identificar Campylobacter spp.
de los alimentos
Cynthia Fontes Candia
Introducción.
 La campilobacteriosis es una enfermedad transmitida por los alimentos.
 Es la tercer enfermedad trasmitida por alimentos.
 Esta relacionado con el síndrome típico diarreico y el síndrome de GuillainBarre.
 Aunque existen mas de 20 Campylobacter spp., las mas comunes son
Campylobacter jejuni y Campilobacter coli.
 La leche cruda se identifica como el principal vehiculo de transición de
campilobacteriosis
Aislamiento de Campylobacter de
alimentos.
 Las cepas de Campilobacter spp. Aislado de seres humanos crecieron en
condiciones aeróbicas a 42°C y fueron serológicamente diferentes de las
cepas de origen animal.
 Las cepas de Campilobacter spp. Aisladas de animales no presentaron
crecimiento a 42°C, lo que sugiere que estas cepas fueron de
Campylobacter fetus.
Condiciones de enriquecimiento para
el aislamiento.
Se presenta un problema ya que en la etapa de crecimiento es común que
otras bacterias crezcan .
Se probaron distintos medios líquidos para el aislamiento de Campylobacter
de carne de pollo.
El protocolo de enriquecimiento para el aislamiento de Campylobacter spp.
de carne de pollo se baso en una proporción de 25g de carne con 225ml de
un medio enriquecido. (1:9 tiene resultados similares.
Entorno microaeróbico.
Bolsitas
Frascos
Selladas
Sistema de
evacuación y
remplazo.
Contienen
componentes
utilizados para
generar oxigeno
Se introduce
una mezcla
microaerobica.
Sustancias bloqueadoras de oxigeno.
 En los medios de cultivo para aislar Campylobacter se utilizan agentes
como, sales de hierro, norepinefrina, piruvato de sodio etc.
 Estas sustancias neutralizan el efecto toxico de los radicales de oxigeno y
ayuda a crear un ambiente microbiótico.
 Oxyrase ®. Es un sistema enzimático que elimina selectivamente oxigeno
de su ambiente circulante.
Se realizo un estudio donde:
131 muestras
de carne de
pollo.
Bolton +
Suplementos
25g de
carne con
100ml de
Bolton +
Oxidase
Condiciones
aeróbicas
Bolton con
Oxirase
25g de
carne con
100ml de
Bolton +
Suplemento
Suplemento: 5% (v / v) de sangre
de caballo lisada
Suplementaron
con 33mg de
cefoperazona y
4mg de
anfotericina B
Se incubaron
a 42°C por
48hr
 La tasa de aislamiento de Bolton Y Bolton con Oxyrase no fueron
significativamente diferentes.
 Se afirma que medio liquido enriquecido de forma natural produce
ambientes microareóbicos adecuados para el crecimiento de
Campylobacter spp.
Medios de placa para Campylobacter
 El mas utilizado es el CCDA (desoxicolato c)efoperazona carbón) ya que
ofrece una fácil identificación de Campylobacter spp.
 En general no hay diferencia en la tasa de aislamiento entre el CCDA y
los medios en base de sangre.
 Al igual que en los medios líquidos se agregan inhibidoras para evitar el
crecimiento de flora bacteriana entérica.
Filtros de membrana.
 Son utilizados para aislar Campilobacter spp.
 Se coloca en la parte superior de la placa y se quita durante la
incubación.
 Es recomendable incluir cefoperazona y anfotericina B
 Al utilizar filtros de membrana en elegido el medio en placa como el
mas eficaz en el aislamiento de Campylobacter spp.
Identificación de Campilobacter spp.
 Pruebas de aglutinación en látex.
 Utiliza anticuerpos poiclonales para detectar o flajelar membranas de
proteinas.
 Son muy utilizados pero solo para la identificar C. jejuni, C. coli y C, lari.
Ensayos inmunoenzimáticos.
 Una reciente evaluación de estos ensayos mostró que la EIA.
 Los ensayos son muy variables y que por sí solos estos ensayos no deben ser
utilizado para la identificación directa de Campylobacter spp. En muestras
de heces.
 Los ensayos EIA no son suficientes para la identificación
Métodos de identificación molecular
 Son rápidas y específicas para la identificación de Campylobacter spp.
 Detectan segmentos específicos de ADN, que son únicos para la
identificación de la especie y en ocasiones la sub especie.
 Se utiliza el método de PCR para la identificación.
Conclusiones.
 Campylobacter es un patógeno transmitido por alimentos significativo
asociado con el consumo de aves de corral cocida o leche cruda. En
productos de aves, las unica Campylobacter spp. son C. jejuni y C. coli. En
muestras con un bajo número de células, el enriquecimiento durante 48 horas
bajo condición aeróbica es recomiendado para alcanzar un número
detectable de Campylobacter células. Bolton y caldo de agua de peptona
tamponada incluso se pueden utilizar como caldos de enriquecimiento y
CCDA es la mejor opción en los medios de placa. La incubación de las
muestras a 42 ° C durante todo el proceso de aislamiento es todavía
preferido. La confirmación de supuestos Campylobacter aislados sugerido por
el FSIS del USDA se basa en la microscopía de contraste de fase y la prueba de
aglutinación en latex.
 Aunque no es aceptada por los organismos reguladores de los alimentos en los
EE.UU., los ensayos de ADN son métodos sencillos y rápidos para confirmar
Campylobacter aislados e identificarlos a nivel de especie en el mismo tiempo.
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