Métodos rápidos de
identificación.
Métodos basados en el ADN para la detección de
bacterias patógenas transmitidas por los alimentos
Ever Hernández Olivas
Universidad Autónoma de Chihuahua
Facultad de Ciencias Químicas
Microbiología de Alimentos
Introducción.
o Enfermedades - bacterias patógenas
Reservorio (animales y
por línea de producción).
Humanos
o La detección de bacterias patógenas (presentes en
bajo número)
o Escondidas en las matrices alimenticias y pueden estar
superadas por el número por un alto contenido de
bacterias propias.
Métodos tradicionales (Etapas de
enriquecimiento y pre-enriquecimiento)
Son laboriosas y consumen mucho tiempo
Acelerar la detección de bacterias patógenas
Incrementar la sensibilidad a la detección
Ejemplos de tecnologías que se han aplicado
para mejorar los métodos para la detección de
bacterias patógenas en los alimentos.
Ventajas y los problemas generales de los métodos basados en
el ADN para la detección y caracterización de bacterias
patógenas transmitidas por los alimentos en comparación con
los métodos basados en la cultura tradicional
Aplicación
Detección
directa
patógenos en alimentos
Ventajas
de No requiere cultivación
Problemas
Puede detectar células muertas (PCR).
Alto nivel de detección debido a un volumen
de prueba pequeño.
Inhibición debido a los componentes de los
alimentos. Muy sensibles a contaminación de
alimentos.
confirmación de cultivo en Rápido y sensible
No se obtiene una colonia, y por eso más
caldos de enriquecimiento
Posible detección automática
adecuado para detectar muestras negativas.
Insensible a altas concentraciones
de microbiota propia
Caracterización de bacterias Puede separar bacterias virulentas
patógenas obtenidas de de las no virulentas por focalización
muestras de alimentos
de genes virulentos
Es posible la caracterización
múltiple
Otras aplicaciones
Puede detectar específicamente
organismos
genéticamente
modificados.
Metodología para la detección e
identificación de bacterias patógenas
por métodos basados en ADN.
o 20-30 años
o Conocidos por las personas que se
ocupan de la microbiología alimentaria
o La capacidad de dos moléculas de
ADN de cadena sencilla in vitro, en
las condiciones adecuadas, para
formar ADN de cadena doble
mediante apareamiento de bases
específicas (hibridación).
o Métodos diferentes basados en el apareamiento de
bases específicas
o hibridación de colonias,
o una sola fase, ensayos de hibridación de líquidos,
o PCR
o Relevantes para la detección de bacterias en los
alimentos.
PCR
(Reacción de polimerización en cadena)
1. Desnaturalización de ADN de la muestra para
obtener cadenas simples objetivo.
2. Unión de primers específicos a el ADN objetivo.
3. La polimerización de ADN.




Rápida
Sensible
Especifica
Proceso simultaneo (gran numero de muestras)
Problemática en la aplicación de PCR
en alimentos.
Detección de reacción positiva
 Puede hacerse mediante la demostración del
fragmento de ADN correcto mediante electroforesis
en gel de agarosa
Máquinas de PCR semi-automatizadas
existentes en el mercado hacen una
determinación
cuantitativa
de
bacterias patógenas a partir de
cultivos puros posibles.
Métodos confiables desarrollados para las bacterias
patógenas pertinentes.










Salmonella
Escherichia coli
Coliformes
Shigella
Vibrio cholerae y no cholerae
Yersinia Enterocolitica
Campylobacter
Listeria monocytogenes
Staphylococcus aureus
Bacillaceae
Bibliografía
 Probes and polymerase chain reaction for detection of foodborne bacterial pathogens, J.E. Olsen et al, International Journal
of Food Microbiology 28 (1995) 1-78
 DNA-based methods for detection of food-borne bacterial
pathogens, John Elmerdahl Olsen *, Food Research International
33 (2000) 257±266.
 Detección de patógenos alimentarios mediante técnicas de PCR,
B. Martín, M. Garriga, J.M. Monfort y T. Aymerich, IRTA.
Tecnología de los Alimentos. Monells, 2009.
Descargar

Metodos rapidos de identificacion - FCQ