Contar células
Hemocitómetro
Basados en la
microscopía
Métodos
para contar
células
Tinción de cultivos en monocapa
Medidores de la resistencia
Electrónicos
Análisis de imagen
Citómetro de flujo
Peso
Métodos
aproximados
Contenido de ADN
Contenido de proteínas
Métodos para contar células
Contar células
El hemocitómetro o cámara de Neubauer
Contar células
1 mm
Profundidad = 0,1 mm
(rojo)
(verde)
(gris)
(amarillo)
(azul)
La cuadrícula del hemocitómetro
Contar células
Se introduce la suspensión de células en el hemocitómetro
Contar células
La región de recuento del hemocitómetro
Contar células
La cámara de recuento del hemocitómetro
Contar células
Recuento de células con el hemocitómetro
Contar células
Observación con microscopio óptico y recuento de células
Contar células
De las tres líneas,
la del centro es la
que corresponde al
límite del cuadrado
Célula muerta
Célula viva
Diferencias entre células vivas y muertas
Contar células
Tinción de cultivos en monocapa
Contar células
Hay tres tipos de contadores electrónicos
Contar células
Funcionamiento del contador de células electrónico (1)
Contar células
Funcionamiento del contador de células electrónico (2)
Contar células
Es importante
poner límites a los
tamaños (diámetro
celular) que se van
a medir. El límite
inferior elimina el
ruido electrónico y
los residuos
celulares. El límite
superior se pone
en 30 micras o en
infinito.
7,6 – 50 mm
Hay que establecer el rango de tamaños a medir
Contar células
El contador distingue las células muertas
Contar células
Con este contador no hay que marcar las células
Contar células
Recuento mediante análisis de imagen
Contar células
Fundamento del recuento de células por análisis de imagen
Contar células
Recuento de células por análisis de imagen
Contar células
Esquema del análisis de la imagen
Contar células
Recuento de células mediante citometría de flujo
Contar células
La difracción de luz frontal permite
contar las células y, a la vez, nos
da información sobre su tamaño.
Citometría de flujo
Contar células
Contar células
Estimación del número de células a partir del peso
Contar células
Estimación del número de células a partir contenido proteico
Contar células
Método de Bradford: fundamento
Contar células
Método de Bradford: protocolo
Contar células
Estimación del número de células a partir contenido de ADN
Contar células
Determinación de ADN por la fluorescencia del H33258
Contar células
Estimación del ADN por la absorbancia en el ultravioleta
Contar células
Comparación de los diversos métodos para contar células
Contar células
Exclusión del azul tripán
Métodos para
determinar la
viabilidad de
las células
Marcaje fluorescente
con naranja de acridina
y ioduro de propidio
Síntesis de novo de proteínas
Incorporación de
3H-timidina al ADN
Métodos para determinar la viabilidad de las células
Contar células
Viabilidad celular mediante tinción con azul tripán
Contar células
Viabilidad celular mediante tinción con azul tripán
Contar células
Naranja de acridina: atraviesa la
membrana celular y tiñe los
ácidos nucleicos, generando una
intensa fluorescencia de color
verde a bajas concentraciones.
Células vivas
Ioduro de propidio: no atraviesa
la membrana de células intactas,
pero sí la de las células dañadas.
Se une a los ácidos nucleicos,
desplazando al naranja de
acridina y genera una intensa
fluorescencia de color rojo.
Células muertas
Viabilidad celular: Naranja de acridina + Ioduro de propidio
Contar células
Medida de la viabilidad celular a partir de la síntesis de proteínas
Contar células
Medida de la viabilidad celular a partir de la síntesis de ADN
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Contar células Funcionamiento del contador de (2