GOBERNACION DE ANTIOQUIA
SECRETARIA SECCIONAL DE SALUD
Y PROTECCION SOCIAL DE
ANTIOQUIA
PROGRAMA CONTROL DE TUBERCULOSIS
COMPARACIÓN ENTRE DOS MÉTODOS DE SENSIBILIDAD DEL
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS, PROCESADOS EN EL
LABORATORIO DEPARTAMENTAL DE SALUD PÚBLICA DE
ANTIOQUIA. AÑO 2012.
Ruth Areiza Martinez- Hilda Alvarez Vidal. Bacteriólogas
Laboratorio Departamental de Salud Pública
Revisado por Margarita Rosa Giraldo C. Epidemióloga.
Gerencia de Salud Pública
Resistencia Antimicrobiana
• La resistencia antimicrobiana es el fenómeno por el cual un
microorganismo deja de verse afectado por un antimicrobiano
al que anteriormente era sensible.
• Los microorganismos resistentes (entre ellos las bacterias, los
virus y algunos parásitos) son inmunes a los efectos de los
antimicrobianos, como los antibióticos, los antivíricos o los
antipalúdicos, de modo que los tratamientos habituales se
vuelven ineficaces y las infecciones persisten y pueden
transmitirse a otras personas.
Resistencia Antimicrobiana
• La resistencia es una consecuencia del uso de los
antimicrobianos, y en particular de su abuso, y surge por
mutación del microorganismo o adquisición de genes de
resistencia.
• Conocer el genoma Mycobacterium tuberculosis es de gran
importancia ya que nos permite descifrar el comportamiento
que tiene ante los antibióticos y así conseguir nuevos
medicamentos para tratar la enfermedad, que está
aumentando cada vez más en todo el mundo.
Resistencia Antimicrobiana
• Es atribuida a mutaciones genéticas que alteran los sitios de
acción del antibiótico, es cromosómica e irreversible.
• 1. La resistencia primaria, es cuando los pacientes que no han
recibido ningún tratamiento previo con medicamentos
antituberculosos, presentan resistencia bacteriana.
• 2. Si una vez efectuado el examen clínico , es dudoso que el
paciente no haya recibido un tratamiento anterior, se habla de
resistencia inicial.
• 3. En los pacientes en que hay constancia de un tratamiento
anterior, de más de un mes de duración se denomina
resistencia adquirida.
Resistencia Natural o Primaria.
• Resistencia Natural o primaria.
Dada por la mutación del bacilo M tuberculosis ligada
al gen KatG. e InhA que detecta la resistencia a
Isoniacida y a la mutación del gen rpoB , detecta la
resistencia a rifampicina. Y para que aparezca una
mutante de estas resistente a los medicamentos
antitb, se necesita una población de bacilos
equivalente a más de 1 bacilo entre 1 millón de
bacilos que son sensibles.
Métodos de identificación FENOTÍPICA de la
resistencia de M. tuberculosis
• Método de las proporciones múltiples
Es el método más utilizado tradicionalmente en los laboratorios
de países en vía de desarrollo, propuesta por Canetti y adoptada
por la OMS. En medio de Lowestein-Jensen
Determina la relación entre el número de bacilos que crecen en
medio sólido con antibióticos y el número de bacilos que crecen
en medio libre o sin antibiótico, determinando así la
concentración de M. tuberculosis resistentes a fármacos en una
población determinada.
Métodos de identificación Fenotípica de la
resistencia de M. tuberculosis
Método de las proporciones múltiples
• Las ventajas de este método son la alta reproducibilidad, la
elevada correlación clínica y su bajo costo.
• Su desventaja principal radica en la demora en la obtención
de resultados: 60 a 90 días a partir de aislamientos primarios
de M. tuberculosis y 28 días después de la obtención de
primocultivos.
Métodos de identificación GENOTÍPICA de la
resistencia de M. tuberculosis
Método molecular
• El método de detección directa para micobacterias es
un método basado en la amplificación de una
secuencia de ácidos nucleicos (NASBA), aplicado a la
tecnología de tiras de ADN.
• Este ha sido una importante herramienta para la
detección rápida de resistencia.
• Es un método confiable y rápido, con una sensibilidad
del 92% y una especificidad hasta del 100%.
Métodos de identificación GENOTÍPICA de la
resistencia de M. tuberculosis
Método molecular
• Según la casa comercial, el proceso tiene tres
pasos:
• El primer paso consiste en el aislamiento de 23
rRNA.
• El segundo paso incluye la amplificación de ARN
por el método NASBA
• y el tercer paso implica la hibridación inversa de
los productos amplificados sobre tiras de la
membrana que usan un sistema automatizado.
Métodos de identificación GENOTÍPICA de la
resistencia de M. tuberculosis
Método molecular PCR
• Su ventaja principal radica El tiempo de análisis es de más o
menos cinco horas.
• El ensayo tiene la capacidad para la detección simultánea de
otras micobacterias.
• La desventaja son los costos del mercado para países en
desarrollo.
Métodos de identificación GENOTÍPICA de la
resistencia de M. tuberculosis
• En esta tecnología se presenta dos tipos de ensayo:
• el Inno LiPA i Micobacteria v2
• y El método de detección directa incluye en su proceso una
PCR múltiple y una hibridación inversa.
OBJETIVO GENERAL
• Comparar la sensibilidad de la Prueba Convencional
“Método de Proporciones Múltiples” frente a la
Prueba “Genotípica Molecular PCR ”, para la
detección de Mycobacterium tuberculosis
multirresistentes, en muestras de cultivo, procesadas
en el Laboratorio Departamental de Salud Pública de
Antioquia año 2012.
Materiales y métodos
Tipo de estudio
• Según el alcance y caracteristicas principales de las muestras de M.
tuberculosis analizadas por el LDSP y según comparación de la
metodología convencional “Método de las Proporciones Múltiples”
frente a la Prueba Molecular, se realizó un estudio de tipo
cuantitativo descriptivo y comparativo.
Población y muestra
• Muestras de Cultivos para Mycobacterium tuberculosis, con o sin
crecimiento, ingresados al LDSP, y analizadas con resultado hasta el
20 de diciembre del año 2012 .
Distribución de las muestras de cultivo ingresadas al
LDSP para pruebas de sensibilidad según resultado.
Antioquia año 2012.
70.0
60.0
50.0
40.0
30.0
20.0
10.0
0.0
%
2152
1180
322
NEGATIVOS
58.9
POSITIVOS
32.3
CONTAMINADOS
8.8
3.654 cultivos:
785 posit* métodos 67%
Distribución de las muestras de cultivo Positivas para
M. tuberculosis por grupos de edad y sexo, LDSP
Antioquia año 2012.
80,0
75,9
70,0
64,8
56,5
60,0
%
50,0
66,7
64,6
43,5
40,0
35,4
35,2
30,0
33,3
24,1
20,0
10,0
0,0
0 a 14
15 a 44
45 a 59
60 y mas
Sin dato
Femenino
43,5
35,2
24,1
35,4
33,3
Masculino
56,5
64,8
75,9
64,6
66,7
Distribución de las muestras de cultivo positivas para
M. tuberculosis Según mes de ingreso al LDSP
Antioquia año 2012.
60 cultivos mes
Distribución de las muestras de cultivo positivas para
M. tuberculosis ingresadas para pruebas de
sensibilidad al LDSP- Antioquia año 2012
Distribución de los cultivos positivos para M.
tuberculosis, según tipo de muestra, LDSP-Antioquia
año 2012
Distribución de los cultivos positivos para M.
tuberculosis, según parámetros de ingreso,
LDSP-Antioquia año 2012
Distribución de los cultivos positivos para M.
tuberculosis, según antecedentes de tratamiento, LDSPAntioquia año 2012
De estos el 10% MDR 7 de 71 *metodos
Resultados de pruebas de sensibilidad realizada a
cultivos positivos para M .tuberculosis, según tipo de
resistencia, Antioquia año 2012.
Resultado:
MDR
Sensibles a los dos
fármacos
sensible a R y
resistente a H
sensible a H y
resistente a R
Total:
Método de
las
Proporciones
51
%
Método
Molecular
%
6,5
51
6,5
88,2
691
88,0
4,5
36
4,6
7
0,9
7
0,9
785
100
785
100
692
35
CAPACIDAD PREDICTIVA DE UNA PRUEBA
DIAGNÓSTICA
Medicamento:
Método en
estudio
Método
Molecular
(+)
(-)
ISONIACIDA + RIFAMPICINA
Método de Referencia
Método de las
Proporciones Múltiples
(+)
46
1
47
(-)
2
687
689
Total
48
688
736
Valores de Sesibilidad, Especificidad y Valores
pronósticos de la prueba molecular
LIMITE
INFERIOR
LIMITE
SUPERIOR
SENSIBILIDAD 95,29%
87,73%
98,48%
ESPECIFICIDAD 99,14%
98,05%
99,65%
VPP
93,10%
85,03%
97,17%
VPN
99,43%
98,43%
99,82%
Captación oportuna del sintomático respiratorio - Detección
temprana del enfermo aplicación estándar del manejo
programático del tratamiento regular
DOTS –TAES
Y evitar resistencias
EN ANTIOQUIA NIÑOS Y NIÑAS SIN
TUBERCULOSIS - DE CERO A SIEMPRE
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