UNIVERSIDAD CENTROOCCIDENTAL “LISANDRO ALVARADO”
DECANATO DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE MEDICINA PREVENTIVA Y SOCIAL
SECCION DE MICROBIOLOGÍA
Microbiología Médica I
TALLER DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS
UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE
MICROBIOLOGÍA
Yudy Aranguren, octubre 2011
PASOS PARA EL DIAGNOSTICO:
1.- MUESTRA:
2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram
3.- CULTIVO
4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS
PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO
MICROBIOLÓGICO DE
COCOS GRAM POSITIVO
PRUEBA DE LA CATALASA
La determinación de la presencia de catalasa
• Se pone en contacto una pequeña cantidad de cultivo bacteriano de
24-48 horas de incubación, con en peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3%.
• La liberación de O2 indica la presencia de catalasa.
H2O2 + catalasa = H2O + ½ O2
Son catalasa negativo:
Son catalasa positivo:
PRUEBA DE LA REDUCCIÓN DE NITRATOS
A NITRITOS
• Permite determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos
por algunas especies bacterianas que poseen la enzima nitrato-reductasa
• Se agrega a un cultivo en caldo unas gotas de:
- Reactivo A: solución de dimetilnaftilamina 0,6%.
- Reactivo B: solución de ácido sulfanílico 0,8%.
• Se observa un cambio de color:
• Positivo: Rojo ladrillo
• Negativo: Sin cambio de color
-
+
FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS
• La fermentación de un carbohidrato (azucares) por
un microorganismo en
particular ayuda a su
identificación.
• La acidez que se produce en el medio se
pone en evidencia a través del cambio de color
-
+
de un indicador de pH
• Se puede evidenciar
la producción de gas
AGAR SALADO MANITOL
PRUEBAS SEGUNDARIAS
1.- COAGULASA
2.- SENSIBILIDAD O RESISTENCIA A LA NOVOBIOCINA
PRUEBA DE LA COAGULASA
La determinación de la presencia de la enzima
-
coagulasa:
• Se pone en contacto una pequeña cantidad de
cultivo bacteriano con plasma con anticoagulante e
incubar 4 horas a 37ºC.
COAGULASA
POSITIVA
Staphylococcus aureus
NEGATIVA
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophyticus
+
-
+
PRUEBA DE SENSIBILIDAD
SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA
SENSIBILIDAD A LA
NOVOBIOCINA
SENSIBLE-SIN
CRECIMIENTO
Staphylococcus epidermidis
NOVOBIOCINA
Sin crecimiento
alrededor del disco
de Novobiocina
RESISTENTE-CON
CRECIMIENTO
Staphylococcus saprophyticus
NOVOBIOCINA
Con crecimiento
alrededor del disco
de Novobiocina
CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL
COCOS GRAM POSITIVOS
• Género Staphylococcus crece a altas
concentraciones de sal (7% NaCl)
• Género Streptococcus NO crece a
altas concentraciones de sal (7% NaCl)
• Género Enterococcus crece a altas concentraciones
de sal de 6,5% per o NO a 7% NaCl
+
-
CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL
Agar Salado Manitol: Crecimiento con o sin fermentación de manitol
1.- Género Streptococcus no crece a 7% de NaCl
2.- Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus saprophyticus
Crecen y NO fermentan el manitol (color rosado del medio)
3.- Staphylococcus aureus
crece y fermenta el manitol
(color amarillo del medio)
PATRONES DE HEMÓLISIS
PATRONES DE HEMÓLISIS
AGAR SANGRE
ALFA: Lisis parcial
de los glóbulos rojos
BETA: Lisis total de
los glóbulos rojos
ALFA
BETA
GAMMA
GAMMA: Sin lisis
PRUEBA DE CAMP
Prueba de CAMP: Las especies del genero Streptococcus del grupo B ( BETA
HEMOLITICOS) produce un factor que aumenta la beta hemólisis de una cepa
indicadora de Staphylococcus aureus.
Staphylococcus aureus
Streptococcus agalactiae
Streptococcus pyogenes
AUTOEVALUACIÓN
TIPO DE HEMÓLISIS
NO HEMOLITICO
CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA ESTREPTOCOCOS
BETA HEMOLITICOS
http://www.youtube.com/watch?v=Zks-2AZuZ1Y&feature=related
Extracto soluble de la pared celular
por acción enzimática
+
Partículas de látex cubiertos
de anticuerpos específicos
CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA BETA HEMOLITICOS
PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA
Pruebas para diferenciar estreptococos Beta hemolíticos (Grupo A y Grupo C)
Con crecimiento
alrededor del disco
de Bacitracina
Sin crecimiento
alrededor del disco
de Bacitracina
PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA
Pruebas para diferenciar Streptococcus pneumoniae y otros estreptococos
Alfa hemolíticos (Streptococcus mitis)
Streptococcus
pneumoniae
Streptococcus
mitis
DISCO DE
OPTOQUINA
DISCO DE
OPTOQUINA
Sin crecimiento
alrededor del disco
de Optiquina
Con crecimiento
alrededor del disco
de Optiquina
PRUEBA DE SENSIBILIDAD A BILIS
Pruebas para diferenciar Streptococcus pneumoniae y otros estreptococos
Alfa hemolíticos (Streptococcus mitis)
Streptococcus mitis
NO lisado en
presencia de Bilis
Streptococcus
pneumoniae lisado
en presencia de Bilis
PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO
MICROBIOLÓGICO DE
BACILOS GRAM NEGATIVOS
PASOS PARA EL DIAGNOSTICO:
1.- MUESTRA:
2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram
3.- CULTIVO
4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS
FERMENTACIÓN DE LACTOSA EN
MEDIO MAC CONKEY
PRUEBA DE MOVILIDAD
• Permite conocer si las bacterias en estudio son móviles o no, eso ayuda en
el proceso de clasificación
• Se realiza una siembra pinchando el medio con la aguja bacteriológica, y
tras incubar 24 h, se observa si se ha producido crecimiento entorno a la zona
inoculada.
PRUEBA DEL INDOL
• Se cultiva la especie en estudio en un caldo rico en triptofano para que
se produzca el Indol
• Se agrega al cultivo tres gotas del reactivo de Kovack
(P-dimetil-aminobenzaldehido )
• Se determina la presencia de Indol a través de la formación de un
anillo rojo en la superficie del caldo
+
-
PRUEBA DEL CITRATO
Determina si el organismo bacteriano en cuestión se desarrolla o no
en un medio que contiene citrato como única fuente de carbono.
Medio citrato de Simmons
KLIGLER: Agar triple azucar hierro
PRUEBA DE LA OXIDASA
• Prueba secundaria
• Permite conocer la presencia o ausencia del
“citocromo C” en bacterias y es una característica
fisiológica muy utilizada en taxonomía
• Se toma una pequeña cantidad de cultivo
bacteriano de 24-48 horas de edad y se transfiere
a un trozo de papel filtro previamente embebido
en n,n-dimetil p-fenilendiamina
• Este reactivo es rápidamente transformado a un
producto oxidado de color púrpura dentro de 30
segundos en presencia de citocromo oxidasa.
Prueba de oxidasa
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