MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE
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 TEMA 6. METODOLOGIA DE MUESTREO Y
ANÁLISIS DE RESIDUOS DE PLAGUICIDAS



Introducción
Muestreo
Análisis de las muestras



Preparación
Extracción
Determinación y Cuantificación
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 El uso masivo de plaguicidas y los consecuentes riesgos
para la salud y el medio ambiente son las causas por las
cuales el análisis de residuos de plaguicidas es uno de los
campos de interés de la Química Analítica.
 Las diferentes Administraciones disponen para su control
una amplia gama de estrategias de inspección concebidas
como único objetivo:


Controlar el posible mal uso y que puede dar lugar a residuos
ilegales
Detectar problemas
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 Problemática de este tipo de analíticas



Muestreo
Diversidad y complejidad de las muestras o matrices
Bajas concentraciones (plaguicidas,metabolitos y
productos de degradación)
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 Características de los métodos de análisis
Gran selectividad
sin interferir los numerosos compuestos
presentes en la matriz
Alta selectividad
determinar niveles de trazas
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 Problemática de residuos en el olivar. Tipo de
muestras:
Suelo
Agua
Hojas
Aceitunas
Aceite
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 Muestras de suelo
Los residuos de plaguicidas proceden de:
- Aplicaciones directas (herbicidas)
- Por traslación al suelo tras aplicaciones
directas al árbol
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 TOMA DE MUESTRA DE SUELO
 No hay normativa
 Submuestras: número considerable para ser representativa
del terreno a evaluar (75 % del error)
 Perfil: primeros 5 cm superficie
 Instrumental: (barrena, pala)
 Cantidad: 1 kg de tierra homogénea
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 Muestras de aguas


Superficiales
Subterraneas
Los residuos de plaguicidas proceden de:
- Fenómenos de escorrentia
- Fenómenos de lixiviación
- Malas prácticas agrícolas
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 TOMA DE MUESTRA DE AGUA
Normativa
 BOE 20/1/82. Derogado pero vigente hasta que no
sea oficialmente sustituido por otro
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 TOMA DE MUESTRA DE AGUA
Tipos de muestras
 Muestras simples

Tomadas en un tiempo y lugar determinado para su análisis
individual
 Muestras compuestas

Obtenidas por mezcla y homogeneización recogidas en el mismo
punto y en diferentes tiempos
 Muestras integradas

Obtenidas por mezclas de muestras simples recogidas en puntos
diferentes y simultáneamente
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 TOMA DE MUESTRA DE AGUA
Material y Aparatos
Envases escrupulosamente limpios, de plástico o vidrio,
realizándose la toma de muestra:
- Directamente sobre el envase
- Equipo tomamuestras
- Equipo automático
Volumen mínimo 500 ml, conservándose en refrigerador a 4ºC
y tiempo máximo entre toma y análisis de 7 dias
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 Características básicas de las aguas
 El control de la calidad de las aguas prepotables
corresponde al MOPU en cumplimiento de la
Directiva 76/464/CEE, relativa a la contaminación
causada por determinadas sustancias peligrosas
vertidas en el medio acuático de la Unión Europea
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 Clasificación aguas superficiales susceptibles de ser
destinadas al consumo humano, en función del tratamiento a
que deben someterse antes de su distribución
(Orden del 11 mayo 1988)
 A-1 Tratamiento físico simple y desinfección
 A-2 Tratamiento físico normal, tratamiento químico y
desinfección
 A-3 Tratamiento físico y químico intensivos, afino y
desinfección
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 Características básicas de las aguas (Plaguicidas)
 Tipo A-1
 Tipo A-2
 Tipo A-3
0.001 mg/l
0.0025 mg/l
0.005 mg/l
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 Características de las aguas potables (Plaguicidas)
Reglamentación Técnico- Sanitaria para el
abastecimiento y control de las aguas potables para
consumo público (Real Decreto1138/1990)
Plaguicidas:
Individuales
Totales
0.1 ppb
0.5 ppb
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 Muestras de hojas
Los residuos de plaguicidas proceden de:
- Aplicaciones directas (insecticidas, fungicidas)
- Por deriva de otras aplicaciones
- Por tras locación de plaguicidas presentes en el
suelo
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 TOMA DE MUESTRA DE HOJAS
 No hay normativa
 Submuestras: número considerable para ser representativa
del olivo a evaluar
 Distribución: tallos a la altura de los ojos y en los cuatros
puntos cardinales, tan del interior como del exterior
 Instrumental: (tijera de podar)
 Cantidad: 100-200 g de tallos tras homogeneizar las
submuestras
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 Muestras de aceitunas
Los residuos de plaguicidas proceden de:
- Aplicaciones directas (insecticidas, fungicidas)
- Por deriva de otras aplicaciones indirectas
- Por tras locación de plaguicidas presentes en el
suelo
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 TOMA DE MUESTRA DE ACEITUNAS
 Real Decreto 290/2003, de 7 de marzo, por el que se
establecen los métodos de muestreo para el control de
residuos de plaguicidas en los productos de origen vegetal.
 Traspone la Directiva 79/700/CEE de la Comisión, de 24 de
Julio de 1979.
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 TOMA DE MUESTRA DE ACEITUNAS
 Objetivo
Establecer los métodos aplicables a los muestreos de
productos de origen vegetal para determinar los niveles de
residuos de plaguicidas de conformidad con el Real Decreto
280/94, por el que se establecen los LMRs de plaguicidas y
su control en determinados productos vegetales
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 TOMA DE MUESTRA DE ACEITUNAS
- El lugar de donde se tome la muestra se elegirá de
preferencia en modo aleatorio, pero cuando esto se a
materialmente impracticable, el lugar se elegirá al azar en las
partes accesibles del lote
- Instrumento de muestreo: cuchara, cazo, sonda
- Naturaleza de las muestras primarias: Unidades enteras, o
envasadas, o tomadas con un instrumento de muestreo
- Tamaño mínimo de cada muestra de laboratorio: 1 Kg
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 TOMA DE MUESTRA DE ACEITUNAS
Deberá evitarse la contaminación y deterioro de las muestras en
todas las fases
- Muestras primarias
Muestra considerada equivalente a la muestra a granel
- Muestra de laboratorio
Cantidad representativa del material extraído de la muestra a
granel y enviada al laboratorio
- Lote
Cantidad de un producto entregado (remolque)
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 TOMA DE MUESTRA DE ACEITUNAS
- Número mínimo de muestras primarias
1 muestra para productos envasados o a granel, que puedan
considerarse bien mezclados u homogéneos
10 muestras para productos envasados o a granel, que no
puedan considerarse bien mezclados u homogéneos, para un
lote de peso >500 Kg
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 TOMA DE MUESTRA DE ACEITES
- Naturaleza de las muestras primarias: Unidades
envasadas, u otras unidades enteras, o tomadas con
un instrumento de muestreo
- Tamaño mínimo de cada muestra de laboratorio:
0.5 l ó 0.5 Kg
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 PREPARACION DE LAS MUESTRAS
La toma de una submuestra (porción analítica)que
tenga una composición representativa de toda la
muestra de laboratorio es la tarea más difícil
Esto requiere que la muestra de laboratorio sea
picada o molturada, en la mayoría de los casos
antes de mezclar y submuestrear
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 PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS.OPERACIONES
Tamizado (muestras de suelos)
Filtrado (muestras de aguas)
Troceado (muestras de hojas)
Triturado (muestras de aceitunas)
Mezclado
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 PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS.
 Instrumental de laboratorio
Tamizadora
Equipos de filtración
Troceadoras mecánicas
Trituradora
Batidora
Molino de martillos
El analista siempre debe de prevenir cambios en al muestra que
puedan originar un resultado analítico sesgado
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 EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE LAS MUESTRAS.
 Depende:



Contenido en grasa
Contenido en agua
Contenido en azucares
Todos los procesos de extracción se llevan a cabo usando
disolventes (agua, metanol, acetona, acetato de etilo, éter de
petróleo, diclorometano, acetonitrilo, etc), bien
individualmente, o mezclas de dos o tres de ellos
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 MÉTODOS EXTRACCIÓN
 Específicos


Ditiocarbamatos
Glifosato
 Multiresiduos (MRM)

Desarrollados para determinar de una vez un amplio
rango de combinaciones de plaguicidas/matrices
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 MÉTODOS EXTRACCIÓN
 Esquema de un Método Multiresiduos (MRM)
C om puestos
analizables por G C
G rasa

N o G rasa
M atriz
M étodo
extracción
M étodo
extracción
T ipo de
m atriz
A cetonapartición
A cetato de
E tilo
E xtracto
E xtracto
P urificación
A utom atico
M anual
N P LC
GPC
OCC
GPC
LLP
P urificación
adicional
P urificación
adicional
A nálisis G C
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 MÉTODOS EXTRACCIÓN
 Métodos de extracción para matrices no grasas
 Métodos de extracción para matrices grasas
El límite entre grasa y no grasa se ha seleccionado
arbitrariamente en el 5%
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 MÉTODOS EXTRACCIÓN
 Métodos de extracción para matrices no grasas



Acetato de etilo
Acetona-partición (Luke)
Acetonitrilo (QuEChERS)
Actualmente se han miniaturizado, reduciendo
notablemente los consumos de reactivos.
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 MÉTODOS EXTRACCIÓN
 Métodos de extracción para matrices grasas



Éter de petróleo (40-50 mg grasa/ml)
Acetona-partición (Luke)
Acetonitrilo-partición
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 MÉTODOS PURIFICACIÓN
 Métodos de extracción para matrices grasas
requieren de una etapa adicional de purificación




GPC
Cartuchos extracción fase sólida
Partición líquido-líquido
Fase sólida dispersa
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 MÉTODOS DETERMINACIÓN Y
CUANTIFICACIÓN

Cromatografía de gases (GC)



Detectores específicos (NPD, ECD, FPD, etc)
MS/MS (Quadrupolo, ITD)
Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)


Detectores específicos (DAD, FLD, UVD)
LC-MS
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 CONCEPTOS CROMATOGRAFICOS

Ver presentación aparte
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 ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS



En tanto no se establezcan oficialmente otros métodos de
análisis, se utilizarán métodos internacionales
reconocidas, o aquellos validados en cada laboratorio
según norma de calidad ISO 17025.
Los laboratorios deben realizar autocontroles para
verificar que la metodología analítica es adecuada.
Los laboratorios deben participar en los ensayos
colaborativos que se organicen tanto a nivel nacional
como Europeo que permitan comprobar el correcto
funcionamiento de los laboratorios y que sus resultados
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 NORMA DE CALIDAD ISO 17025

Ver presentación aparte
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 EJERCICIOS COLABORATIVOS

Ver presentación aparte