• Laboratorio Área Tecnología de Producción, Ingeniero Carlos
Cantera
• Centro de Investigación y Tecnología del Cuero , CITEC
• Campus Tecnológico CIC- INTI cueros
• Camino Centenario y 505, MB Gonnet- La Plata
OBJETIVOS
• General :Desarrollo de depilado enzimático
• Específico : Vulnerar la epidermis del bovino para
permitir la difusión de preparados enzimáticos
comerciales.
Los procesos difusivos, a través de los estratos de la
epidermis, desempeñan un papel preponderante para
que las enzimas alcancen más rápidamente sus sitios
de acción y expresen su actividad depilatoria . La
epidermis se presenta como una barrera a la que es
necesario atravesar para que las enzimas lleguen a
destino .
•
Yates, J.R.Studies in depilation. IX. Effect of skin thickness and diffusion on the
rate of depilation of sheepskins, J. Am.Leath.Chem.Ass, 64, 71-81, 1969
Empleo de Microscopía Óptica, Microscopía Electrónica de Transmisión
y Espectroscopía FT-Raman en el análisis de la epidermis bovina
• En este trabajo se analizaron a escala de laboratorio mediante
Microscopía óptica, Microscopía Electrónica de Transmisión y
Espectroscopía FT-Raman las modificaciones a nivel
morfológico y molecular la epidermis del bovino luego de
exponerla a tratamientos que intentan vulnerarla.
Reactivos utilizados para vulnerar la barrera epidermis
• SO3Na2 (sulfitólisis)
queratina
• Dodecilsulfato de sodio
( SDS)
emulsifica lípidos intercelulares
Ensayos preliminares a escala de laboratorio evidenciaron que SDS+sulfito de sodio+
Tripsina, sobre sustrato epidermis , aumentaban la degradación del sustrato
Cantera, C.S.; Goya, L.; Galarza , B.Hair saving unhairing process. Part 5-Characterization of enzymatic
preparations applied in soaking and unhairing processes; J.Soc.Leath.Tech.Chem.2003; 87 : 69-77.
epidermis
Fig u re
2.
Po ssib le
m a c ro
ro u te s f o r su b sta n c e
p e n e tra tio n a c ro ss h u m a n skin via in ta c t h o rn y la ye r o r
h a ir fo llic le s o r e c c rin e
sw e a t g la n d s. Ta ke n ,w ith
p e rm isio n , fro m Pa n c h a g n u la R., “ Tra n sd e rm a l d e live ry
o f d ru g s”, In d ia n Jo u rn a l o f Ph a rm a c o lo g y, 1 9 9 7 , 2 9 ,
1 4 0 -1 5 6 .
Foto 3
Foto 4
Foto 5
Microscopía
Óptica
MICROSCOPÍA
ÓPTICA
22 horas
• SO3Na2 + SDS 5 horas
• Preparado enzimático comercial derivado de
proteasas animales ( tripsina)+Proteasa alcalina 17
horas
• Coloración Tricrómica
Control
Microscopía
ElectrónicaDE
de TRANSMISIÓN
Transmisión – MET
MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA
5 horas
SO3Na2 + SDS
2 horas
Preparado enzimático comercial ( proteasa de
origen animal , tripsina )
sulfito de sodio 1,23g/l :Se encontró separación entre lámina basal y
capa basal del epitelio .
Corte semifino, Azul de toluidina
Sulfito de sodio 1,23g/l 2h+ preparado enzimático comercial de origen
pancreático 3h.
N
M-
ML/13/06 SULFITO
1
N
MN
N
1
*
*
LM
*
Estrato basal. 1- espacio intercelular
N- núcleo. M- melanosoma. LM- Lámina basal espacio modificado*
Espectroscopía FT- Raman
Trozos de piel bovina de 10 cm x 10 cm se cubrieron durante 24
horas con:
• Terpenos
• Emulsión acuosa a base de : surfactantes y terpenos
• Buffer de bicarbonato (control)
Figura 9
Resultados FT- Raman
• los espectros obtenidos en la región entre 2800 cm-1 a
3050 cm -1 corresponden al espectro vibracional de los
enlaces C-H mayoritarios en la composición lipídica .
• Fue posible adaptar la técnica a pesar de las dificultades
que presenta la piel del bovino, pelos gruesos, espesor
del estrato corneo, distribución de lípidos intercelulares
CONCLUSIONES
Conclusiones
FT-Raman : fue posible adaptar la técnica a pesar de las dificultades que presentaba la
piel del bovino:
• Manto de pelos gruesos
• Espesor del estrato corneo
• Distribución de lípidos intercelulares
Microscopía Electrónica de Transmisión: los resultados preliminares demostraron que
es una herramienta útil para evaluar los pretratamientos y tratamientos utilizados
para aflojar el pelo del bovino
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Depilar sin sulfuro de sodio empleando preparados