Estudio experimental en ratones infectados con la
cepa Nicaragua de Trypanosoma cruzi tratados con
Benznidazol (bz) y allopurinol (alo).
NL Grosso, M López Alarcón, J Bua, A Riarte y LE Fichera.
INP/ANLIS/Malbrán Paseo Colón 568; CAECIS, Universidad Abierta Interamericana. Ciudad de Buenos Aires
[email protected]
En nuestro laboratorio caracterizamos biológica y molecularmente un aislamiento de T. cruzi procedente de Nicaragua. Esta
cepa que llamamos Nicaragua pertenece al linaje Tc I, fue comparada con CL Brener, Tul, Sylvio X-10/4, Y y Brasil. En cultivos
axénicos Tc Nicaragua mostró mayor susceptibilidad al benznidazole (Bz) con respecto a Brasil y al allopurinol (alo), con
respecto a CL Brener. La sensibilidad del estadío intracelular de Nicaragua al alo, mostró más resistencia en cultivos primarios
de cardiomiocitos que en las infecciones en líneas celulares como VERO y BESM. En la infección experimental determinamos
el tropismo de Nicaragua hacia el músculo cardíaco y esquelético (Grosso et al, 2010 Experimental parasitol).
Basándonos en la heterogeneidad de las diferentes cepas que circulan en zonas endémicas de países afectados por la
enfermedad de Chagas nos proponemos estudiar en esta etapa el efecto de estas drogas en la infección experimental murina,
con el fin de observar la evolución de la infección en la etapa crónica. Nuestro objetivo específico es evaluar el efecto del
tratamiento con bajas dosis de bz combinado con alo en ratones C3H/He infectados con 103 ip de Tc Nicaragua.
Tratamiento:
Las drogas fueron suministradas a ratones C3H infectados con 103 tripomastigotes de Nicaragua 2 dpi con 30 dosis de 100, 75
o 50 mg/kg/día de Bz. Otros 3 grupos recibieron además, 20 mg/Kg/día o 64mg/Kg/día de allopurinol durante los 30 días
siguientes. A los 6 meses pi fueron sacrificados. Finalmente, a otros grupos de ratones que fueron tratados durante la etapa
aguda de la infección, se les suministró además 30 dosis de 64mg/Kg/día de allopurinol durante 30 días y luego fueron
sacrificados. Se evaluó la presencia de parásitos en sangre, la cantidad de p/ml por qPCR y en los cortes histológicos del
músculo estriado y cardíaco asociado al índice de inflamación.
75
75 Bz
Indice de inflamación
Bz B
50 z 5
Bz alo 0
5 0 20
Bz alo s
5 0 20
al d
o6
4d
Bz
75 Bz7
Bz alo 5
7 5 20
Bz alo d
7 5 64
al d
o6
4
Bz s
Cr 10
ón 0
ic
os
Bz B
50 z 5
Bz alo 0
50 20
Bz alo s
50 20
al d
o6
4d
Bz
B
75 z7
Bz alo 5
75 20
al d
Cr
o6
ón
4d
ic
B
os z1
0
Bz ulti 0
75 mo
al s
o6
4s
0
Parásitos en corazón de ratones C3H crónicos
infectados con Tc Nicaragua tratados en cronicidad
3
2
1
0
al
Bz
Indice de inflamación en corazón de ratones C3H crónicos
infectados con Tc Nicaragua tratados en cronicidad
4
50
+
25
4
3
2
1
0
0
Bz
5
50
50
B 50
5
z+ B
B 0
5
20 z
z+ B
0
50 2 z+ B a
B 0a 64 z+ llo
z+ llo al 64
64 +6 lo al
al 4a cr lo
lo ll ón
+6 o ic
4a cr o
llo ón
75
i
cr co
B
z+
ón
20
ic
al 7
o
lo 5 7
+6 Bz 5B
4a + 6 z
llo 4a
cr llo
ón
C ico
ró
ni
co
50 Bz + 64 alo
1
Tratamientos 2dpi
50
0
2
0+
al
Bz
o2 alo
6
0d
50
4
cr
+6
on
4a
ic
lo
o
cr
on
Bz Bz
ic
7
75
o
5+
a
a
Bz
l
l
Bz
75 o20 o64
75
d+
cr
al
on
a
o6
4d lo6
i
4c co
+
r
al
o6 oni
co
4
cr
on
Cr ico
ón
ic
os
200
100
0
3
Indice de inflamación
400
1
50
Parásitos por ml de suero
2300
2
Bz
o2 alo
64
0d
50
cr
+6
o
4a
ni
lo
co
cr
on
Bz
Bz
ic
7
75
o
5+
a
a
Bz
lo
Bz
l
64
75 o20
75
d+
cr
al
o
a
o6
4d lo64 nico
+
cr
al
o6 oni
co
4
cr
on
Cr i c o
ón
ic
os
qPCR en sangre de diferentes tratamientos
4
3
Bz
50 Bz
Indice de inflamación en corazón de ratones C3H crónicos,
infectados con Tc Nicaragua.
4
Parasitos por sección de corazón
Los ratones tratados sobrevivieron a la infección. No se encontraron
parásitos en sangre en la etapa aguda de la infección en
comparación con los controles infectados sin tratar, los que
sobrevivieron un 20%. En el miocardio de los tratados con 50 Bz y
alo en sus diferentes dosis se observó una disminución significativa
de parásitos respecto del tratamiento con 50 Bz. Con 75 y 100 Bz no
se observaron diferencias entre estas dosis y sus combinaciones
con alo. Por PCR cuantitativo se observó una disminución
significativa en la cantidad de parásitos/ml de sangre en los ratones
tratados vs los controles infectados y entre los tratados con Bz y
allopurinol vs los tratados con Bz (*P<0,05, t student). Desde el
punto de vista histopatológico, en los corazones de los ratones
tratados con allopurinol en la etapa crónica de la infección se
observó disminución de parásitos y del índice de inflamación.
Parásitos por sección de corazón
Parásitos en corazón de ratones C3H crónicos
infectados con Tc Nicaragua
Bz
5
Resultados:
75 Bz + 64 alo
Control de infección crónica
CONCLUSION: Los resultados obtenidos nos permiten concluir que todos los tratamientos ensayados con Bz y
alo disminuyeron significativamente los parásitos en los tejidos, y que la dosis mas baja de Bz (50) combinada
con alo fue capaz de provocar una disminución significativa de parásitos. Observamos además un mayor efecto
anti-inflamatorio con 75 Bz más alo (d). Por Real Time PCR se observó una disminución significativa en la
cantidad de parásitos/ml en la sangre de los ratones que recibieron tratamiento combinado en la infección aguda
respecto de los tratados solamente con Bz.
Estos resultados sugieren la sinergia de Bz más alo en la reducción del efecto patológico de la infección por T.
cruzi.