Evaluación del tratamiento con benznidazol y
allopurinol en ratones infectados con T. cruzi
Nicaragua.
NL Grosso, M López Alarcón, J Bua, A Riarte y LE Fichera. Instituto Nacional de Parasitología Dr. M. Fatala Chaben/ANLIS/Malbrán,
Universidad Abierta Interamericana, CAECIHS. Buenos Aires, Argentina
En este trabajo evaluamos el efecto del tratamiento con benznidazol (BZ) y allopurinol (ALO) en ratones infectados con T. cruzi
Nicaragua, aislamiento previamente caracterizado en nuestro laboratorio (Grosso, 2010), mediante estudios parasitológicos,
moleculares (PCR) y anatomo-patológicos. Específicamente nuestro objetivo fue obtener una mayor eficacia con la combinación
de drogas de efecto conocido sobre T. cruzi Nicaragua en el modelo agudo de C3H/He. Los ratones se infectaron ip con 103
tripomastigotes, y se trataron con 30 dosis vía oral 2 dpi, con BZ 50 o 75 mg/Kg/día o BZ combinado con ALO 20 o BZ con ALO
64mg/Kg/día, en forma secuencial. A los 6 meses pi se administraron 30 dosis de 64 mg/Kg/día de ALO a un grupo de ratones que
ya habían recibido los tratamientos en la etapa aguda. Los ratones se sacrificaron a los 6 meses post-tratamiento y al mes los
que recibieron la segunda dosis de ALO. Se evaluó la presencia de parásitos en sangre por microscopio óptico y qPCR, y por
histopatología de corazón y músculo esquelético relacionados con los índices de inflamación y fibrosis.
Tratamiento:
Las drogas fueron suministradas a ratones C3H infectados con 103 tripomastigotes de Nicaragua 2 dpi con 30 dosis de 100, 75 o 50
mg/kg/día de bz. Otros 3 grupos recibieron además, 20 mg/Kg/día o 64mg/Kg/día de allopurinol durante los 30 días siguientes. A los
6 meses p.i fueron sacrificados. Finalmente, a otros grupos de ratones tratados durante la etapa aguda de la infección, se les
dosificó 30 dosis de 64mg/Kg/día de allopurinol durante 30 días. Luego fueron sacrificados. Se evaluó la presencia de parásitos en
sangre y en los cortes histológicos del músculo estriado y cardíaco asociado al índice de inflamación.
Esquema de trabajo:
Resultados:
50 bz + 64 alo
75 bz
*
0
*
lo
75
Bz
ya
Bz
ya
75
lo
0
Indice de inflamación en corazón de ratones C3H crónicos, Fibrosis en el corazón de ratones C3H/He tratados en forma combinada o no
infectados con Tc Nicaragua.
durante la etapa aguda y/o crónica de la infección
2.0
Indice de inflamación
4
3
2
1
*
0
Bz
50 Bz 5
Bz alo 0
50
20
Bz alo s
50 20
alo d
64
d
Bz
75 Bz7
Bz +alo 5
75
2
Bz +alo 0d
75
+a 64d
lo6
4
Bz s
Cr 10
ón 0
ico
s
Todos los ratones tratados sobrevivieron con una disminución
significativa de parásitos comparado con los controles sin tratar,
en los que sólo sobrevivió el 20 %. El agregado de ALO a los
tratamientos de 50 y 75 BZ provocó una disminución de parásitos
tisulares entre un 66% y 45% respectivamente en miocardio y una
disminución significativa de la parasitemia dosada por qPCR.
El nivel de fibrosis disminuyó entre un 50 y 70 % en los ratones que
recibieron tratamiento combinado tanto con ALO en forma
secuencial o adicional en la etapa crónica, respecto de los
tratamientos con BZ. Los índices de inflamación de los tejidos
comprometidos disminuyeron significativamente cuando los
ratones fueron tratados con 75 BZ más ALO.
*
2
Bz
Tratamiento
64mg/Kg/día de
alopurinol.
1
50
RT-PCR y
ratones
lactantes
Balb/c..
2
4
Bz
Diagnostico
parasitológico.
3
50
Patología.
Patología..
6
Pa rá sitos por m l de sue ro
Supervivencia..
Supervivencia..
4
75 bz + 64 alo
Nivel de fibrosis
Parasitemia.
6 mpi
qPCR de suero de ratones C3H/He infectados con la cepa de Tc Nicaragua tratados
con Bz o con Bz y alo en la etapa aguda o crónica de la infección
bz
bz
75
75
alo
bz
se
75
c
alo
cró
n
to.
30 dpi
CRONICO
bz
bz
50
50
alo
bz
se
50
c
alo
cró
n
Tratamien
AGUDO
Parásitos por sección del corazón
2
dpi
Parásitos por sección del corazón de ratones C3H/He en la etapa crónica de la
enfermedad de Chagas tratados durante la etapa aguda de la misma o no
1.5
1.0
0.5
**
*
0.0
50
50 5 Bz 50 B
Bz 0 B + 6 z
+2 z+ 4c
0 2
50 al+ 0 al
Bz 64
+6 c
75 7 4 al
75 7 Bz+ 5 Bz
Bz 5 B 64
+2 z+ c
0 20
75
Bz 75 B al+ al
+ 6 z + 64 c
4 a 64
l + al
Co 64 c
ntr
ol
Tc infeccion
Control de infección crónica
Conclusión: La adición de ALO secuencial y su adición en la etapa crónica al tratamiento con 50 BZ en la
etapa aguda de la infección, potenció el efecto parasiticida en el miocardio con menor lesión tisular. Estos
resultados sugieren una sinergia de BZ y ALO en la reducción del efecto patológico de la infección crónica
por T. cruzi Nicaragua.