Salmonella
Laboratorio de Microbiología Aplicada
Dra. Esther Z. Vega Bermúdez
Salmonella sp.
Salmonella
Salmonella
enterica
Salmonella
bongori
Subs.
enterica
Subs.
salamae
Subs.
arizonae
Subs.
diarizonae
Subs.
indica
Subs.
houtenae
From: Porwollik, S., et al., 2004. Characterization of Salmonella enterica subspecies I genovars by Use
Of Microarrays. J. of Bacteriol. 186:5883-5898.
Incidencia de Salmonella
Características
 Enterobacterias
 Bacilos Gram (-)
 Mótiles con
flagelación perítrica
 No esporulan
 No fermentan
lactosa
 2, 300 especies
 Crece entre 40-140oC
Variantes Genéticas
 Mediada por Plasmidios
– Utilización de lactosa y sucrosa
 Microorganismos atípicos pueden “escapar”a la
detección en situaciones clínicas
 Las especies de Salmonella no son un grupo homogéneo
de organismos
Reservorios / Alimentos Relacionados
 Carnes crudas
 Aves
 Huevos
 Leche y productos lácteos
 Pescado
 Camarones
 Salsas
 Mezclas para bizcocho
 Postres de crema
 otros
Patogénesis
 Dosis infecciosa tan bajo como 15-20 células (depediendo de hospedero)
 Antígenos estructurales (pared celular o
antígeno O, H- flagelar y el IV-antígeno
capsular termolábil -poder frente a los
ácidos)
 Sustancias tóxicas
 Endotoxinas
 Exotoxinas (efecto irritante y citotóxico
para el tracto intestinal)
 Ruta oral-fecal
Sintomatología y Enfermedades
 Período de incubación de 6-
48hrs
 Diarreas
 Dolor abdominal
 Fiebre entre 8-72hrs
 Dolor de cabeza y
en el cuerpo
 Escalofríos
 Naúseas
 Vómitos
 Septicemias
 Bacteremias
 Cistitis, endocarditis y
osteomilitis
 Síndrome de Reiters que
puede terminar en artritis
crónica
 Fiebre tifoidea ó
paratifoidea
Diagnóstico y Tratamiento
 Pruebas de serología y de heces fecales
 Aislar el paciente
 Tratamiento para todos en el hogar
 Antibíoticos
Muestreo en Alimentos
Métodos convencionales de aislación que
requieren de cinco días para confirmar resultados.
Cultivo 37-420C o en nevera.
Salmonella
Metodología
 Pre-Enriquecimiento
– Caldo de lactosa
 Permite la recuperación de células “heridas”
 Aumenta la razón Salmonella:Non-Salmonella
– Agua de dilución peptonada
Productos Animales
 Dilución 1:10
– I.e.. 25 g muesra a 225 ml de caldo
 24 horas a 35 oC
Enriquecimiento Selectivo
 1 ml de caldo de Lactosa
– 10 ml Selenite Cystine
– 10 ml tetrathionate broth
 Permite el crecimiento de Salmonella
 No hay resultados despúes de este paso
 24 horas a 35oC
Placas Selectivas
 Tres tipos de medio selectivo
– Bismuth Sulfite
 Marrón, gris, negro con “metallic sheen”
– Hektoen Enteric Agar
 Azul-verdoso con o sin centro negro o “glossy black”
– Xylose Lysine Desoxycholate
 Rosado con o sin centro negro
 Estriado de “Selective Enrichments”
 Incubación de 18-24 h a 35oC
 Resultados – PRESUMPTIVE POSITIVE
Medio Diferencial – Discernimiento
bioquímico
 Triple Sugar Iron Agar
–
–
–
–
Streak Slant and Stab Butt
1% Lactosa
0.1% Glucosa
Sulfato Ferroso
 Indicador de H2S
– Tiosulfato
 Producción de H2S
– Rojo fenol
 Alkalina – Rojo, Acido – Amarillo
– Incubación a 35 oC por 24 horas
Triple Sugar Iron Agar
 Reacción de Salmonella
– Red Slant (Alkalino)
– Acid Butt (Amarillo)
– Precipitado Negro
Lysine Iron Agar- Discernimiento bioquímico
 Stab Butt and Streak Slant
– Se quiere condiciones anaeróbicas en el fondo para que ocurra la
decarboxilación
 Decarboxilación a partir de L-Lysina
 Sulfato Ferroso
 Bromo Cresol Purple
– Violeta – Alkalino, Amarillo - Acido
 Glucosa
 Tiosulfato
Lysine Iron Agar
 Reacción de Salmonella
– Alkaline Butt – Purple
– Precipitado Negro
 Sólo es negativo si hay condiciones ácidicas, pueden
obtenerse otras reacciones no típicas
Confirmación Bioquímica
 Aglutinación de antígenos superficiales con anticuerpos
específicos para Salmonella
 Antígenos de Salmonella
– O – Somático – Lipopolisacárido
– H – Flagellar – Proteína
– K – Capsular - Polisacáridos
Aglutinación
 Mezcle anticuerpos con un poco de cultivo
 Aglutinación es un resultado positivo
Aislamiento vs. Enumeración
 Usualmente sólo se aisla
 Se enumera para propósitos de investigación
– Método MPN
– Método de filtración por membranas
 No “Accurate”
Otros métodos- kits bioquímicos
Table 1. Partial list of miniaturized biochemical kits and automated systems for identifying foodborne bacteria*
( 5, 8, 15, 16, Format
21, 35, 36 ). Manufacturer
System
Organisms
b
API
biochemic
bioMerieux
Enterobacteriaceae, Listeria, Staphylococcus, Campylobacter, Nonal
fermenters,
anaerobes
Cobas IDA
biochemic
Hoffmann
Enterobacteriaceae
b
al
LaRoche
Micro-ID
biochemic
REMEL
Enterobacteriaceae, Listeria
al
EnterotubeI biochemic
Roche
Enterobacteriaceae
I
al
Spectrum
biochemic
Austin
Enterobacteriaceae
10
al
Biological
RapID
biochemic
Innovative
Enterobacteriaceae
al
Diag.
BBL Crystal biochemic
Becton
Enterobacteriaceae, Vibrionaceae, Non-fermenters, anaerobes
al
Dickinson
Minitek
biochemic
Becton
Enterobacteriaceae
al
Dickinson
Microbact
biochemic
Microgen
Enterobacteriaceae, Gram negatives, Non-fermenters, Listeria
b
al
Vitek
biochemic
bioMerieux
Enterobacteriaceae, Gram negatives, Gram positives
a
al
Microlog
C
Biolog
Enterobacteriaceae, Gram negatives, Gram positives
oxidation
MISb
Fatty
acidaa Microbial-ID
Enterobacteriaceae, Listeria, Bacillus, Staphylococcus, Campylobacter
Walk/Away
biochemic
MicroScan
Enterobacteriaceae, Listeria, Bacillus, Staphylococcus, Campylobacter
a
al
Replianalyz biochemic
Oxoid
Enterobacteriaceae, Listeria, Bacillus, Staphylococcus, Campylobacter
a
er
al
Riboprinter
nucleic
Qualicon
Salmonella, Staphylococcus, Listeria, Escherichia coli
acida
Cobas
biochemic
Becton
Enterobacteriaceae, Gram negatives, Non-fermenters
a
b
Micro-ID
al
Dickinson
Malthus
conductan
Malthus
Salmonella, Listeria, Campylobacter, E. coli, Pseudomonas, coliforms
a
ce
Bactometer
impedanc
bioMerieux
Salmonella
eafrom: Feng, P., App.I., FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed.
* Table modified
a Automated systems
NOTE:
Thissystems
table is adopted
intendedAOAC
for general
reference
only and
lists known available methods. Presence on this list does
b Selected
Official
First or Final
Action.
not indicate verification, endorsement, or approval by FDA for use in food analysis.
Identificación basada DNA-DNA
Table 2. Partial list of commercially-available, nucleic acid-based assays used in the detection of
foodborne bacterial pathogens* (2, 5, 8, 12, 14, 22, 25, 36, 37).
Organism
Trade Name
Format
Manufacturer
Salmonella
GENE-TRAKc
probe
GENE-TRAK
BAX
PCR
Qualicon
BINDb
phage
BioControl
Probelia
PCR
BioControl
* Table modified from: Feng, P., App.I, FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed.
a Polymerase chain reaction
b Bacterial Ice Nucleation Diagnostics
c Adopted AOAC Official First or Final Action
NOTE: This table is intended for general reference only and lists known available methods. Presence on this list
does not indicate verification, endorsement, or approval by FDA for use in food analysis.
Identificación basada en detección de antígenos
Table 3. Partial list of commercially-available, antibody-based assays for the detection of foodborne pathogens and toxins* (3, 5, 8, 12, 33, 36).
Organism/toxin
Trade Name
Assay Formata
Manufacturer
Bactigen
LA
Wampole Labs
Spectate
LA
Rhone-Poulenc
Microscreen
LA
Mercia
Wellcolex
LA
Laboratoire Wellcome
Serobact
LA
REMEL
RAPIDTEST
LA
Unipath
Dynabeads
Ab-beads
Dynal
Screen
Ab-beads
VICAM
CHECKPOINT
Ab-blot
KPL
1-2 Teste
diffusion
BioControl
SalmonellaTEKe
ELISA
Organon Teknika
TECRAe
ELISA
TECRA
EQUATE
ELISA
Binax
BacTrace
ELISA
KPL
LOCATE
ELISA
Rhone-Poulenc
Assurancee
ELISA
BioControl
Salmonella
ELISA
GEM Biomedical
Transia
ELISA
Transia
Bioline
ELISA
Bioline
VIDASe
ELFAb
bioMerieux
OPUS
ELISAb
TECRA
PATH-STIK
Ab-ppt
LUMAC
Reveal
Ab-ppt
Neogen
Clearview
Ab-ppt
Unipath
UNIQUEe
Capture-EIA
TECRA
* Table modified from: Feng, P., App.I, FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed.
a Abbreviations: ELISA, enzyme linked immunosorbent assay; ELFA, enzyme linked fluorescent assay; RPLA, reverse passive latex agglutination; LA, latex
agglutination; Ab-ppt, immunoprecipitation.
**Automated
CAUTION:ELISA
unless the assays claim that they are specific for the O157:H7 serotype, most of these tests detect only the O157 an tigen; hence will also react
b
with
O157
strains that are notE.
of coli
H7;serotype.
These O157, non-H7
strains, generally do not produce Shiga toxins and are regarded as not pathogenic for
c EHEC
- Enterohemorrhagic
ETEC - enterotoxigenic
E. coli
NOTE:
This
table is intended
for generaltoreference
only
and
listsreact
known
available
methods.
Presence
this enteric
list doesorganisms.
not indicate verification, endorsement, or
humans.
Furthermore,
some
antibodies
O157
can
also
cross
with
Citrobacter
, E. hermanii
andon
other
d
Also detects E. coli LT enterotoxin
approval by FDA for use in food analysis.
e Adopted AOAC Official First or Final Action
Salmonella
Identificación basada en la utilización de sustratos
Table 4. Partial list of other commercially available rapid methods and specialty substrate media for
detection of foodborne bacteria* (4, 8, 13, 20, 27, 36).
Organism
Trade Name
Formata
Assay Manufacturer
Salmonella
Isogridb
HGMF
QA Labs
OSRT
Medium/ motility
Unipath (Oxoid)
Rambach
Medium
CHROMagar
MUCAP
C8esterase
Biolife
XLT-4
Medium
Difco
MSRVb
Medium
* Table modified from: Feng, P., App.I, FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed.
a Abbreviations: APC, aerobic plate count; HGMF, hydrophobic grid membrane filter; ATP, adenosine
triphosphate; MUG, 4-methylumbelliferyl-ß-D-glucuronide; ONPG, O-nitrophenyl ß-D-galactoside; MPN, most
probable number.
b Adopted AOAC Official First or Final Action.
This table is intended for general reference only and lists known available methods. Presence on this
cNOTE:
Application for water analysis
list
does
indicate verification, endorsement, or approval by FDA for use in food analysis.
d EHEC -not
enterohemorrhagic Escherichia coli
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Salmonella Isolation - Universidad de Puerto Rico Humacao