Resultados, información y
preguntas
PAGE-SDS
INDUCCIÓN DE PROTEÍNA
RECOMBINANTE
18 marzo, 2015
COMENTARIOS:
¿Qué es lo que deben de hacer con las imágenes de sus geles?
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Impriman la imagen de su gel
Midan la longitud del gel, del inicio del gel al final.
Midan cuanto migró cada banda de peso molecular. Del inicio del
gel hasta donde está la banda.
Calculen el Rf de cada banda del estándar.
Saquen el logaritmo del peso molecular de las bandas del
estándar
Hagan la gráfica de log de peso molecular vs Rf
Calculen el peso molecular de la β-lactamasa. Para ello ver la
banda que se va intensificando conforme el tiempo de inducción
es mayor. O bien revisar lo que les muestro después de las
imágenes de los geles
Por fa intenten responder a las dos preguntas planteadas en la
última transparencia
Nos vemos el Jueves con su presentación para la discusión
Std de peso molecular
SeeBlue Plus2 Preteñido
(Invitrogen)
•
Fosforilasa B
•
Mioglobina
Curva estándar de proteínas producto del corrimiento
electroforético en gel de poliacrilamida-SDS (PAGE-SDS)
1. Para encontrar en
donde está la banda de
interés se hace una
curva estándar.
2. interpolar el log del
peso molecular y
conocer en que
posición o Rf debe estar
la proteína
No recuerdo que equipo fue el que primero puso sus muestras EN CADA GL
pero aquí les pongo sus geles
Mesa 2: Equipos 3 y 4
Mesa 1: Equipos 1 y 2
0
20 40 60 std
0 20 40 60
98
62
49
38
98
62
49
38
28
28
17
17
14
14
0
20 40 60 std 0
20
40
60
Mesa 3: Equipos 5 y 6
98
62
49
38
28
17
14
0
20 40 60 std 0 20 40 60
Solo recuerden que el
estándar en color
amarillo-naranja
corresponde al peso
molecular de 98 kDa.
Buscar la secuencia de nucleótidos
de un gen
1. Ir a la
página del
National
center for
biotechnology
research
2. Buscar en
Gene
3. Anotar la
secuencia
buscada en
inglés
Al pulsar la tecla da los resultados,
por ejemplo, PARA TEM1 DE E. coli
Pulsar en donde dice E. coli
Buscar en la página en donde dice
formato FASTA y pulsar
El gene en formato FASTA
Traducir a proteína
• Al tomar la secuencia en formato fasta la
pueden introducir a cualquier buscador que lo
que haga sea traducir la secuencia de
nucleótidos a proteína,
• De esa manera ustedes obtendrán el peso
molecular esperado de su proteína
TEM1. beta lactamasa de E. coli
proteína madura
MHPETLVK
SGKILESFRP
RVDAGQEQLG
LTDGMTVREL
GGPKELTAFL
IPNDERDTTM
SRQQLIDWME
DKSGAGERGS
TTGSQATMDE
VKDAEDQLGA
EERFPMMSTF
RRIHYSQNDL
CSAAITMSDN
HNMGDHVTRL
PAAMATTLRK
ADKVAGPLLR
RGIIAALGPD
RNRQIAEIGA
RVGYIELDLN
KVLLCGAVLS
VEYSPVTEKH
TAANLLLTTI
DRWEPELNEA
LLTGELLTLA
SALPAGWFIA
GKPSRIVVIY
SLIKHW
Peso molecular de 28,905 daltones
PREGUNTAS:
1. ¿Cuál es el peso molecular de la secuencia de ácidos nucleicos para
que nos de un peso molecular de la proteína en 28,905 daltones?
2. ¿Porqué nuestro inserto en el gel de agarosa, aquel que usamos para
detectar los productos de la restricción, era de 1200 pb?
Descargar

Resultados PAGE-SDS