Inoculación de fitopatógenos
Curso:
Diagnóstico de enfermedades
vegetales.
Ing. Agr. Vivienne Gepp, MSc.
6 de mayo de 2011
Objetivos
• Conocer las principales técnicas
que se usan para inocular
hongos, bacterias, virus y
nematodos fitopatógenos.
Esquema de la clase
PARTE TEÓRICA
• Inóculo, calidad y cuantificación.
• Métodos de inoculación de hongos,
bacterias, virus y nematodos en hojas,
raíces, tallo, frutos.
PARTE PRÁCTICA
• Inoculación
LUEGO DE LA CLASE
• Observación, análisis e informe de
resultados
Inóculo
• Hongos:
– trozos de micelio
– esporas
– esclerotos
• Bacterias: – unidades formadoras de colonias
(UFC)
• Virus:
– partículas en macerado, buffer, etc.
• Nematodo
s:
– larvas, huevos, quistes
Calidad del inóculo
• Viable – en activo crecimiento (micelio,
bacterias), esporas capaces de germinar
• Homogéneo:
– siembra de hongo en centro de placa vs.
suspensión de esporas
• “Acostumbramiento a crecer en medio
de cultivo” – pérdida de patogenicidad
(Ralstonia) o de producción de esporas
(Septoria, Cercospora)
Cuantificación del inóculo
• Hematocitómetro
• Turbidez
• Unidades formadoras de colonias
Cuantificación del inóculo en
hematocitómetro
Rayado Neubauer:
• 2 porciones c/u con 9 cuadrados principales de 0,1 mm3
• divididos en 16 cuadrados menores de 0,05 mm3
Cuantificación de inóculo
• Turbidez - bacterias
– Escala de McFarland: BaCl2 + H2SO4
– Densidad óptica: colorímetro o
espectrofotómetro a 450 – 650 mµ
Cuantificación de inóculo
• Recuento de colonias  unidades
formadoras de colonias (UFC)
Inoculación al follaje
•
Penetración por estomas o epidermis - mayoría
penetra en 24 hs. en condiciones adecuadas de
humedad y 20-24ºC
•
Métodos:
1. pulverización:
•
•
•
•
0,5% Tween o 0,1% jabón
cereales: 1º frotar hoja con dedos mojados para que se mojen
mejor
0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar – adhiere esporas y mantiene
humedad
aceite dispersa esporas, mantiene humedad. Oidios pierden
infectividad.
Métodos de inoculación al
follaje
1. pulverización:
• 0,5% Tween o 0,1% jabón
• cereales: 1º frotar hoja con dedos
mojados para que se mojen
mejor
• 0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar –
adhiere esporas y mantiene
humedad
• aceite dispersa esporas,
mantiene humedad. Oidios
Métodos de inoculación al
follaje
2. espolvoreo con talco
• royas: humedecer hojas 1º
(aspersión)
• oidios – seco
3. rozar o colocar hojas
esporuladas sobre sanas
(previamente rociadas)
4. inmersión en suspensión de
Métodos de inoculación al
follaje
4. infiltración
5. colocar trozo de
micelio
Métodos de inoculación al
follaje
Inoculación de virus
Plantas indicadoras
• Tabaco, pepino, Chenopodium quinoa, etc.
– Sin síntomas
– Lesiones locales
– Síntomas sistémicos
Plantas indicadoras
Transmisión mecánica
1. Macerado de planta enferma
2. Abrasivo (carborundum)
3. Planta sana
= Transmisión
“por jugos”
Transmisión por pulgones
Transmisión por propagación
vegetativa
• tubérculos, bulbos, estacas, etc.
• injerto

An overview of the paintings of Christina Brodie
http://www.microscopyuk.org.uk/mag/indexmag.html?http://www.microscopyuk.org.uk/mag/artnov05/cbpaint.html
Inoculación al suelo o raíces
• efecto del suelo: microflora conducente
o supresivo  reducir variación  sin
suelo
• humedad muy alta para Pitáceas,
• + síntomas a > temp. hasta 28ºC en
gral.
• Métodos:
– infestación de suelo
– hidroponia
– “cut and dip”
Inoculación al tallo o rama
• Generalmente con heridas
• Corte longitudinal – inocular
inmediatamente – cubrir para evitar
deshidratación. (gel, algodón mojado)
• Patógenos vasculares
Inoculación al tallo o rama
• Patógenos vasculares:
– axila - pinchar a través de
gota o con aguja o
escarbadiente
contaminado.
– inyección al tallo – evita
stress de transplante
Inoculación en órganos
carnosos
• Pinchazo
• Sacabocado
• Corte
Condiciones ambientales
Antes de inocular:
• Patógenos que penetran por estomas
• Patógenos que penetran por heridas
• Virus
Condiciones ambientales
Post-inoculación:
• Humedad para bacterias y hongos – factor
más importante
• Virus
BIBLIOGRAFÍA
• DHINGRA, O.D.; SINCLAIR, J.B. 1985. Basic
plant pathology methods.
• FRENCH, E.R. y HERBERT, T. 1980. Métodos de
investigación fitopatológica.
• KIRÁLY, Z. 1970. Methods in plants pathology
with special reference to breeding for disease
resistance.
• LELLIOTT, R.A.; STEAD, D.E. 1987. Methods for
the diagnosis of bacterial diseases of plants.
• THE COMMONWEALTH MYCOLOGICAL
INSTITUTE. 1968. Plant pathologist's pocketbook.
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Aislamiento de hongos fitopatógenos